Бациллюс субтилис (Bacillus subtilis, сенная палочка): биохимические свойства, выращивание и применение. Bacillus subtilis (cенная палочка)

Бациллюс субтилис или cенная палочка (лат. Bacillus subtilis ) - вид грамположительных спорообразующих аэробных бактерий, представителей рода бациллы (Bacillus ). Bacillus subtilis - один из наиболее хорошо изученных микроорганизмов.

Название сенная палочка происходит из-за того, что ранее Bacillus subtilis изолировался исключительно из сенных отваров . Bacillus subtilis имеет вид бесцветной прямой палочки, размером примерно 0,7 мкм в толщину и 2-8 мкм в длину. Bacillus subtilis может размножаться делением и спорами. Иногда отдельные Bacillus subtilis , после поперечного деления, остаются соединенными в нити.

Bacillus subtilis (сенная палочка), благодаря продуцируемым антибиотикам и способности закислять среду обитания, является антагонистом патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, таких как сальмонелла , протей , стафилококки , стрептококки , дрожжевые грибки; продуцируют ферменты, удаляющие продукты гнилостного распада тканей; синтезируют аминокислоты, витамины и иммунноактивные факторы. Некоторые штаммы Bacillus subtilis являются продуцентами гиалуроновой кислоты .

Bacillus subtilis может быть причиной пищевых отравлений человека (код по МКБ-10 A05.4).

Bacillus subtilis - действующее вещество лекарственных препаратов

Бациллюс субтилис (Bacillus subtilis ) - действующее вещество некоторых лекарственных препаратов. В данном контексте под термином «бациллюс субтилис» понимается определенный штамм (штаммы) бактерий вида Bacillus subtilis . По фармакологическому указателю бациллюс субтилис относится к группам «Противодиарейные средства» и «Другие иммуномодуляторы». По АТХ бациллюс субтилис имеет код «A07FA Антидиарейные микроорганизмы». Показания к применению бациллюс субтилис:

• острые кишечные инфекции у детей
• дисбактериоз кишечника различной природы
• бактериальный вагиноз
• профилактика гнойно-септических осложнений в послеоперационном периоде.

В качестве активного вещества лекарственных препаратов используется лиофилизированная микробная масса живого антагонистически активного штамма Bacillus subtilis 534 или штамма Bacillus subtilis 3H,
селектированного по признаку хромосомной устойчивости к антибиотику - римфапицину из производственного штамма Bacillus subtilis 534. Российскими предприятиями 48 ЦНИИ Минобороны России ФГУ, г. Екатеринбург, ЗАО «Биофарма» и несколькими украинскими предприятиями производится лекарственный препарат Биоспорин , содержащий смесь Bacillus subtilis штамм 2335 (также называемый Bacillus subtilis 3) и Bacillus licheniformis 2336 (также называемый Bacillus licheniformis 31) в пропорции 3:1.

В России также зарегистрированы (были зарегистрированы) лекарства, в которых основным действующим веществом являлись Bacillus subtilis: (штамм 534), Бактиспорин (штамм N 3H).

Препараты на основе сенной палочки Bacillus subtilis (Споробактерин, Биоспорин, Бактиспорин) и сходного микроорганизма Bacillus cereus (Бактисубтил) обладают антимикробной активностью и могут использоваться при бактериальных инфекциях при невозможности приема антибиотиков или для селективной деконтаминации тонкой кишки при синдроме избыточного бактериального роста. Споры этих бактерий, превращаясь в толстой кишке в активные формы, вырабатывают в процессе жизнедеятельности кислые метаболиты - органические кислоты. При этом рН в толстой кишке сдвигается в кислую сторону и подавляется рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (Белоусова E.А., Златкина А.Р.).

В состав лекарственного препарата Энзимтал , имеющего разрешение на применение на территории Украины (позже отозванном), имеется грибковая амилаза - амилолитический фермент, получаемый из грибов Aspergillus oryzae и непатогенных бактериальных культур Bacillus subtilis (Кирик Д.Л., Полякова И.Ф.).

Bacillus subtilis - пробиотик

Кроме перечисленных выше лекарств-пробиотиков , штаммы Bacillus subtilis входят в состав пищевых добавок. В России продаются (продавались) БАДы, содержащие Bacillus subtilis: Бактистатин, Супрадин Киндер гель (производство Германии), Ветом и другие.

БАД Бактистатин содержит метаболиты бесклеточной культуральной жидкости Bacillus subtilis штамм 3 (содержащей в том числе витамин Е), носитель цеолит, ферментированный гидролизат соевой муки, антислеживающий агент стеарат кальция (или аэросил), ингредиенты капсулы (желатин медицинский, титана диоксид, индиготин). Бактистатин рекомендуется разными авторами, в частности, для коррекции синдрома избыточного бактериального роста лёгкой степени (Логинов В.А.), как дополнительного средства: при синдроме кишечной недостаточности (Левченко С.А.), Н.pylori- ассоциированном гастрите (Грищенко Е.Б.) и других.

Штаммы Bacillus subtilis используются в ряде лекарств и продуктов для ветеринарии и сельского хозяйства. В частности, пробиотик «Субтилис» (жидкая форма «Субтилис-Ж» и порошок «Субтилис-С»), включающий в свой состав собой микробную массу живых спор бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis применяется в животноводстве, птицеводстве, рыбоводстве для профилактики и лечение заболеваний ЖКТ бактериальной этиологии, дисбактериоза, легочных инфекций, увеличения продуктивности, получения здорового потомства, подавления роста патогенных и условно патогенных микроорганизмов (

К числу бактерий, которые широко распространены в природе, относится и сенная палочка (Bacillus subtilis). Впервые она была описана в 1835 году. Такое получили из-за того, что изначально культуру выделяли из прелого сена. В лабораторных условиях в закрытом сосуде варили сено в воде и настаивали 2-3 дня. После этого в емкости образовывалась колония искомых бактерий.

Изучение

В науке существует понятие «модельный организм». Это различные , которые отбираются для интенсивного изучения тех или иных процессов или свойств и проведения научных опытов. Общеизвестным модельным организмом являются инфузории, один из представителей которых – инфузория-туфелька (Paramecium caudatum) – нам хорошо знаком по школьным урокам.

Сенная бацилла также принадлежит к модельным организмам. Благодаря ей было досконально изучено спорообразование у бактерий. Она же является моделью для понимания механизма работы жгутиков, исследований в области молекулярной генетики.

Был проведен эксперимент по выращиванию Bacillus subtilis в условиях, близких к невесомости, для изучения изменения генома популяции. Кроме того, эти бактерии используются для исследования влияния космического ультрафиолетового излучения и способности к адаптации к нему живых организмов. На примере бацилл изучается возможность выживания микроорганизмов в космосе и условиях других планет, в частности, Марса.

Краткая характеристика

Как хорошо видно на фото, сенная палочка имеет прямую вытянутую форму с тупыми закругленными концами, обычно бесцветна. Диаметр бактерии в среднем составляет 0,6 мкм (0,0006 мм), длина колеблется от 3 до 8 мкм (0,003-0,008 мм). При таких размерах ее можно рассмотреть и сделать фото, используя современный школьный микроскоп. Бациллы подвижны благодаря имеющимся жгутикам. Они растут по всей поверхности клетки, что можно увидеть на фото.

Эти бактерии, преимущественно являясь аэробами, для своей жизнедеятельности нуждаются в молекулярном кислороде. Хотя некоторые штаммы способны переключаться на бескислородное дыхание (факультативные анаэробы).

Бактерия традиционно относится к почвенным микроорганизмам. Из почвы она попадает на листья растений, фрукты и овощи. Но при этом встречается и в воздушной пыли, и в воде. Является частью нормальной микрофлоры кишечника животных и человека. Хорошо развивается при температуре +5°…+45°С, оптимальный диапазон составляет 25-30°С.

По имеющимся фото можно убедиться, что имеют следующий вид:

• на поверхности жидкостей – тонкая пленка с беловатым оттенком;
• на плотных средах – бархатистое покрытие с мелкими морщинками и волнистыми краями; может быть бесцветным, сероватым или розовым.

Размножение и спорообразование

Сенная палочка, как и остальные бактерии, размножается простым продольным делением клетки пополам. , образовавшиеся после такого деления, нередко остаются соединенными между собой тонкой нитью. Такие нити легко различимы на фото.

Клетки, развившиеся из спор, и первые их потомки неподвижны. Способность перемещаться появляется только у следующих поколений.

Питание

Некоторые микробы, например, молочнокислая лактобактерия плантарум (Lactobacillus plantarum), угнетают развитие сенной палочки. Сенная бацилла служит пищей для простейших. Так, начало одной из пищевых цепочек выглядит следующим образом: сенная бацилла – инфузория-туфелька – моллюск – рыба и т.д. вплоть до человека.

Методы «охоты» у простейших отличаются. Например, у амебы (Amoeba) постоянно образуются и исчезают выросты внутренней среды клеток (ложноножки или псевдоплодия). Ими она окружает жертву и втягивает ее внутрь клетки. А, например, инфузория-туфелька для поглощения пищи имеет клеточный рот (цитостом). На фото он виден как углубление на теле. С помощью растущих рядом с ним и объединенных в сложные структуры ресничек в рот загоняется вода вместе с содержащимися с ней бактериями. Инфузория находит по химическим веществам, которые они выделяют.

Патогенность

Согласно большинству классификаций сенная палочка не считается патогенной для человека и животных. Она помогает переваривать пищу, расщепляя белки и углеводы, борется с патогенной микрофлорой кишечника и кожных покровов.

Учеными установлено, что среди бактерий, оказывающихся в ране человека, всегда присутствуют сенные палочки. Они вырабатывают ферменты, разрушающие отмершую ткань, антибиотики, угнетающие патогенные микробы, и даже оказывают легкое антиаллергическое воздействие. Доказано, что эта бацилла подавляет развитие основных возбудителей хирургических инфекций.

Тем не менее, отмечается и негативное воздействие этой бактерии:

• иногда вызывает аллергию, часто выражающуюся в виде сыпи на теле человека;
• некоторые штаммы могут вызывать пищевые отравления после употребления испорченных ими продуктов питания;
• может быть причиной тяжелых глазных инфекций человека.

Использование

Сенные бациллы-палочки являются основным действующим веществом многих лекарственных препаратов. Их применяют при острых кишечных инфекциях у детей, при дисбактериозе кишечника, в послеоперационный период для профилактики нагноений и т.п.

Наиболее часто основой лекарств служит штамм Bacillus subtilis 534 (препарат Споробактерин) или полученный из него селективным путем штамм Bacillus subtilis 3Н (препарат Бактиспорин). Используется в фармакологии и штамм 31, например, в производстве препарата Биоспорин. Все эти лекарства имеют антимикробную направленность. Их ценность особенно велика в борьбе с бактериальной инфекцией, когда больному по тем или иным причинам нельзя принимать антибиотики.

Сенные палочки также входят в состав многих пищевых добавок (БАД). Например, Супрадин Киндер гель, Ветом, Бактистатин и другие.

Она является основой многих препаратов для животных. Это Бактерин-СЛ, Эндоспорин, Протексин, Энтеробактерин и другие. Их с успехом используют в животноводстве, птицеводстве и рыбоводстве для борьбы с болезнетворными бактериями, ленточными червями и для повышения иммунитета.

Существует отдельная группа препаратов на основе Bacillus subtilis для растениеводства: Алирин-Б, Гамаир, Фитоспорин и другие. Основная их задача – защита растений от болезней, вызываемых бактериями и грибами. Несомненным плюсом является их абсолютная безвредность для человека при попадании в организм вместе с плодами.

Используется сенная палочка и для ферментации овса и бобов. В Японии существует традиционное блюдо натто из сброженных соевых бобов. Для их брожения используется специальный штамм палочки – Bacillus natto. Из экстрактов натто даже производят пищевые добавки, а в США на основе Bacillus natto разработан ветеринарный препарат Глоген-8.

Промышленно производятся вырабатываемые сенной палочкой ферменты для расщепления белков (протеазы, амилазы). Так, протеаза входит в состав бытовых моющих средств, а также средств для очищения шкур от белков и жира при их выделке.

Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарии и может быть использовано для получения препарата из группы пробиотиков. Штамм бактерий Bacillus subtilis BKM В-2287 выделен из почвы. Клетки грамположительны, капсулы не образуют, образуют круглые споры, тип дыхания - аэробный. Гидролизует глюкозу, маннит, лактозу. Не сбраживает сахарозу, инозит, сорбит, мальтозу. Не образует газа при сбраживании. Подавляет рост стафилококков, кишечной палочки, энтеробактерий, цитробактерий, аэромонас. Штамм используют как производственный для получения пробиотического препарата, названного авторами "Субтилис+". Препарат нормализует деятельность желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных, птицы, рыбы; перспективен в лечении и профилактике бактериальных инфекций. 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности для получения пробиотического препарата, применяемого в ветеринарии при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыб.

Известен штамм Bacillus subtilis 534 - продуцент пробиотика “Споробактерин”, который предназначен для профилактики и лечения желудочно-кишечного тракта, дисбактериозов. SU 1708350, кл. А 61 К 35/66.

Недостатком является небольшие сроки хранения, т.к. содержит живые бактерии, которые не могут длительное время сохранять свои свойства, низкая чистота препарата, что имеет узкую область применения - как кормовая добавка для животных. Штамм также чувствителен к антибиотикам за исключением полимиксина, что ограничивает сферу применения препарата.

Известен штамм Bacillus subtilis 3Н (ГИСК №248), несущий свойство антибиотикорезистентности, используемый для получения пробиотического препарата “Бактиспорин”, который применяют совместно с антибиотиками для лечения и профилактики дисбактериоза, ферментной недостаточности органов пищеварения, гнойных инфекций, пищевой аллергии. RU 2067616 С1, кл. А 61 К 35/74, 10.10.1996.

Известен штамм Bacillus subtilis TPAXC-KM-117, проявляющий ингибирующую активность по отношению к патогенным видам микроорганизмов и обладающий множественной лекарственной устойчивостью. Штамм резистентен к тетратциклину, рифампицину, аленициллину, хлорамфениколу, апректомицину. На его основе готовят антибиотикорезистентный пробиотик для лечения и профилактики инфекционных заболеваний при одноименной антибиотикотерапии (RU 2118364 С1, кл. С 12 N 1/20, 27.08.1988).

Известен штамм Bacillus subtilis ВКМ B-2250 (RU №2184774, кл. А 61 К 35/74, 10.07.02), который является основой препарата для ветеринарных целей и рыбного хозяйства.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является выявление нового эффективного штамма-продуцента пробиотического препарата для ветеринарных целей и рыбного хозяйства.

Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в повышении эффективности лечения, увеличения усвояемости кормов, продуктивности и привесов животных, птицы, рыб за счет использования пробиотического препарата на основе предложенного штамма-продуцента, стабильности препарата при хранении в широком диапазоне температур внешней среды.

Штамм Bacillus subtilis Б-9 выделен из почвы, депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов (ИБФМ им. К.Г.Скрябина) под номером ВКМ В-2287.

Штамм Bacillus subtilis ВКМ В-2287 может храниться в лиофилизированном состоянии в течение нескольких лет или на косяках с агаризованной средой на основе мясопептонного бульона с обязательным пересевом не реже 1 раза в 2 месяца на эту же среду.

Характеристики штамма.

Культурально-морфологические признаки. Палочки. Размер односуточной агаровой культуры 3-5 мкм. Клетки окрашиваются положительно по Грамму, образуют круглые споры, одиночные, центральные диаметры меньше диаметра клетки. Колонии на МПА белые, пигмент в среду не выделяют.

Физиологические признаки. Аэроб, оптимальная температура роста 37° С и рН 3,5-8,0. Возможен рост в диапазоне температур 4-50° С. Отношение к NaCl - рост при содержании до 3%.

Биохимические признаки. Расщепляет глюкозу, лактозу, маннит. Несбраживаемые соединения углерода: сахароза, инозит, сорбит, мальтоза, лактоза. Утилизирует цитрат и ацетат. При сбраживании не образует газа. Продуцирует оксидазу, каталазу.

Антагонистические признаки. Штамм Bacillus subtilis BKM В-2287 подавляет рост стафилококков, протея, клебсиелл, кишечной палочки, энтеробактерий, цитробактерий, аэромонас, дрожжевых грибов.

Штамм Bacillus subtilis BKM В-2287 не является патогенным для растений, животных, рыбы и человека.

Данные таблицы 1 показывают антагонистическую активность тестовых штаммов микроорганизмов (метод отсроченного антагонизма).

Для культивирования штамма Bacillus subtilis BKM В-2287 используют жидкую питательную среду, содержащую гидролизат казеина - 5 см 3 · дм -3 (N aM =300 мг%); кукурузный экстракт - 80 см 3 · дм -3 (N aм =290 мг %), MnSO 4 5Н 2 О - 0,250 г-дм -3 ; MgSO 4 7H 2 O - 0,300 г-дм -3 ; FeSO 4 7H 2 О - 0,015 г-дм -3 ; CaCl 2 2Н 2 О - 0,052 г-дм -3 ; NaCl - 11,000 г-дм -3 , дистиллированную воду.

Предварительно сухую биомассу микроорганизмов высевают в пробирку с бульоном. При появлении видимого роста колонии пересевают на мясопептонный агар в пробирки.

Отбирают типичные колонии, которые пересевают на жидкую среду во флаконах. Через 22 часа всю выросшую массу переносят в 20-литровую бутыль с 10-ю литрами питательной среды и культивируют 26 часов при 37-39° С, получая посевной материал.

Питательную среду на основе гидролизата казеина помещают в биологический реактор, стерилизуют 60 мин при 1 атм, охлаждают до 39° С и засевают посевным материалом из бутыли в соотношении 1:9.

В процессе аэробного культивирования рН среды поддерживают в пределах (6,8-7,2) ед. рН, подпитывая среду (10-15)% -ной глюкозой до конечной концентрации (0,1-0,2)%. При достижении биологической концентрации по БК (15-20) 10 9 кл.см -3 и (8-10) 10 9 кл.см -3 по БKt прекращают добавление глюкозы до снижения рН 4,0 и отключают подачу воздуха. Затем отключают обогрев реактора, среду охлаждают до (15-19)° С. Полученную охлажденную культуру перекачивают в емкости или расфасовывают во флаконы.

При указанном способе культивирования получают пробиотический препарат в виде жидкой формы с содержанием (80-95)% спор и живых вегетативных клеток бактерий штамма Bacillus subtilis ВКМ В-2287.

Предложенный пробиотический препарат безвреден, не содержит посторонней микрофлоры. Безвредность проверена на белых мышах массой тела (18-20) г, которым перорально вводили препарат в объеме 1,0 мл.

Препарат обладает специфической активностью: количество клеток в одной дозе препарата (8-20)10 9 кл.см -3 , антагонистическая активность - зона задержки роста тестовых микроорганизмов составляет от 10 до 38 мм.

Таким образом, предлагаемый штамм Bacillus subtilis ВКМ В-2287 может быть использован как производственный для получения препарата пробиотического действия, рекомендуемого для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы, рыбы.

Изобретение поясняется примерами.

Пример 1. Испытания предложенного пробиотического препарата на новорожденных телятах и поросятах.

Эффективность препарата на основе предложенного штамма Bacillus subtilis ВКМ В-2287 была испытана на новорожденных телятах и поросятах с диагнозом диарея, протекавшей на фоне сложной эпизоотической обстановки в хозяйстве. Контрольные группы телят и поросят содержались согласно принятой в хозяйстве технологии. Телятам и поросятам опытных групп дополнительно задавали препарат на основе предложенного штамма Bacillus subtilis BKM В-2287 перорально с небольшим количеством воды за 20 минут до кормления в разовой дозе на голову по 15 мл телятам и по 20 мл поросятам три раза в сутки в течение трех суток. Наблюдения показали, что в опытных группах через сутки после дачи препарата улучшилось общее состояние всех животных, диарея прекратилась, а еще через двое суток все животные были практически здоровы. Состояние животных в контрольных группах характеризовалось продолжением состояния диареи, падеж составил 10% у телят и 22% у поросят.

Пример 2. Добавление пробиотического препарата “Субтилис+” в корм аквариумных рыб.

Проводилось кормление подрощенной молоди золотых рыб (оранда) экструдированным кормом с добавлением пробиотического препарата “Субтилис+”. Количество корма составляло 10 кг, добавленного пробиотика 1 мл. Количество рыб в опытной и контрольной группах составляло по 250 экз. Кормление осуществляли 4-6 раз в сутки. Корм поедался охотно. Темп роста молоди в опытной группе по сравнению с контрольной составил 22%. Выход рыб в опытной - 98%, в контрольной - 78%. Вода в аквариумах не портилась, мутность отсутствовала.

Пример 3. Сохранность цыплят в первые недели.

Проведены испытания “Субтилис+” на цыплятах бройлерной птицефабрики (по 5 птичников в опытной и в контрольной группах). Отход цыплят контрольной группы, не получавших пробиотик, составил 4%, опытных - 0,2%. В опытных группах цыплята более интенсивно набирали вес. После первых трех дней средний вес цыпленка в контрольной группе равнялся 61 г, в опытной - 70 г.

Проведенные испытания показали эффективность препарата “Субтилис+”, получаемого на основе предложенного штамма Bacillus subtilis BKM В-2287.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Штамм бактерий Bacillus subtilis BKM В-2287, используемый для получения пробиотического препарата, предназначенного для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыбы.

Диссертация

Гатауллин, Айрат Гафуанович

Ученая cтепень:

Кандидат биологических наук

Место защиты диссертации:

Код cпециальности ВАК:

Специальность:

Микробиология

Количество cтраниц:

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Микробный антагонизм - основа создания биотерапевтических препаратов для коррекции дисбиотических состояний

Глава 2. Споровые пробиотики и их воздействие на макроорганизм

2.1. Препараты из бактерий рода Bacillus

2.2. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus

2.3. Биологически активные вещества, продуцируемые аэробными спорообразующими бактериями

2.4. Факторы патогенности бактерий рода Bacillus 34 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. Объекты и методы исследований

3.1. Объекты исследований

3.2. Методы исследований 43 3.2.1. Оборудование и методики

Глава 4. Характеристика выделенных штаммов

4.1. Изучение морфологических и физиолого-биохимических свойств штаммов

4.2. Антагонистическая и адгезивная активность штаммов B.subtilis в опытах in vitro

4.3. Определение антибиотикоустойчивости и плазмидного профиля штаммов B.subtilis

Глава 5. Влияние штамма B.subtilis 1719 на макроорганизм

5.1. Изучение токсичности, токсигенности , вирулентности и пробиотической активности штамма B.subtilis 1719 в опытах in vivo

5.2. Изучение влияние штамма В.subtilis 1719 на показатели иммунитета в опытах in vivo при экспериментальном дисбиозе

Глава 6. Технологическая характеристика штамма B.subtilis 1719 как основы пробиотического препарата

6.1. Оценка ростовых свойств на различных жидких питательных средах

6.2. Изучение жизнеспособности и антагонистической активности штамма B.subtilis 1719 при хранении

Глава 7. Сравнительная характеристика свойств штамма B.subtilis\l\9 и штаммов, составляющих основу некоторых коммерческих препаратов-пробиотиков. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) На тему "Биологические свойства штаммов Bacillus subtilis, перспективных для создания новых пробиотиков"

Актуальность проблемы

На современном этапе в медицинской микробиологии появились новые данные, обосновывающие использование сапрофитной микрофлоры, которая способна в процессе своей жизнедеятельности вырабатывать биологически активные вещества (БАВ ), подавляющие рост патогенных микроорганизмов, злокачественных опухолей и нормализующие различные патологические и биохимические процессы в организме человека .

В последнее десятилетие для профилактики и лечения заболеваний желу-дочно - кишечного тракта широко используют биопрепараты на основе живых микробных культур спорообразующих

Бактерии рода Bacillus, одна из наиболее разнообразных и широко распространенных групп микроорганизмов, являются важными компонентами экзогенной флоры человека и животных .

Род Bacillus привлекает внимание исследователей с давних времен. Накопленные знания в области микробиологии, физиологии, биохимии, генетики бактерий свидетельствуют о преимуществах Bacillus как продуцентов биологически активных веществ: ферментов, антибиотиков, инсектицидов . Высокая приспособляемость к различным условиям существования (наличие или отсутствие кислорода, рост и развитие в значительном диапазоне температур, использование в качестве источников питания различных органических или неорганических соединений и т.д.) способствуют распространению бацилл в почве, воде, воздухе, пищевых продуктах и других объектах внешней среды, а также в организме человека и животных.

Разнообразие метаболических процессов, генетическая и биохимическая вариабельность, устойчивость к литическим и пищеварительным ферментам , послужили обоснованием использования бацилл в различных областях медицины. Управление по контролю за качеством продовольственных и лекарственных средств США , присвоило Bacillus subtilis статус GRAS (generally regarded as safe) - вполне безопасных организмов, что является обязательным условием для применения этих бактерий в производстве лекарственных препаратов .

Активность бацилл проявляется в отношении широкого спектра патогенных и условно патогенных микроорганизмов. Благодаря синтезу разнообразных ферментов и других веществ они регулируют и стимулируют пищеварение, оказывают противоаллергенное и антитоксическое действие. При применении бацилл существенно повышается неспецифическая резистентность макроорганизма. Эти микроорганизмы технологичны в производстве, стабильны при хранении и, что существенно важно, экологически безопасны .

Лечебные и профилактические препараты на основе живых непатогенных микробов, способные оказывать при естественном способе введения благоприятные эффекты на физиологические и биохимические функции организма хозяина через оптимизацию его микробиологического статуса, относят в настоящее время к препаратам - пробиотикам .

Из бацилл наибольший интерес вызывают штаммы В. subtilis. По изученности генетических и физиологических свойств они занимают второе место после Е. coli. О больших возможностях В. subtilis в биотехнологии свидетельствует факт создания банка данных по молекулярной генетике этого штамма -SubtiList, в который вносится вся информация о бактериальном геноме .

Анализ результатов научных исследований, проводимых у нас в стране и за рубежом, свидетельствует о масштабах использования бактерий рода Bacillus для получения продуктов из биомассы бактерий или их метаболитов. Известные способы культивирования

На основе живых бактерий рода Bacillus, созданы препараты - пробиоти-ки, которые безвредны для макроорганизма, имеют широкий диапазон лечебно-профилактического действия и экологическую безопасность . Важное научно-практическое значение имеют результаты, посвященные использованию живых микробных культур рода Bacillus для лечения желудочно-кишечных заболеваний у человека и сельскохозяйственных животных .

В настоящее время в практическом здравоохранении широко используют известные препараты - пробиотики: бактисубтил , споробактерин, биоспорин, бактиспорин, субалин, цереобиоген , энтерогермин и другие .

Показания к лечебному применению и терапевтическая эффективность этих препаратов ограничивается свойствами штаммов , используемых для их производства. Определяющее значение при этом имеет спектр антагонистической активности против патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, являющихся причиной нарушения микроэкологии в различных биотопах организма человека или животных. Кроме того, нельзя не учитывать способности бацилл к продукции БАВ (полипептидные антибиотики, ферменты и др.) и их антибиотикорезистентности.

Многообразие и возникающая антибиотикоустойчивость микроорганизмов, участвующих в развитии дисбиотических нарушений, с одной стороны, а также вариабельность биосинтетических возможностей у разных штаммов B.subtilis, с другой, обуславливают целесообразность постоянного мониторинга штаммов, обладающих направленной пробиотической активностью и/или являющихся продуцентами различных БАВ.

Цель работы:

Изучить биологические свойства выделенных штаммов B.subtilis и оценить возможность их использования для разработки оригинального спорового пробиотика.

Задачи исследования:

1. Изучить морфологические, физиолого-биохимические, антагонистические, адгезивные и другие свойства выделенных культур B.subtilis в опытах in vitro и выбрать для дальнейших исследований наиболее перспективный штамм .

2. Оценить пробиотическую активность выбранного штамма B.subtilis в опытах in vivo.

3. Подобрать питательную среду, оптимальную для накопления биомассы изучаемого штамма B.subtilis.

4. Определить жизнеспособность и антагонистическую активность выбранного штамма B.subtilis при хранении.

5. Сравнить свойства оригинального штамма B.subtilis и культур, используемых для изготовления коммерческих препаратов-пробиотиков.

Научная новизна.

На основе изучения морфологических, физиолого-биохимических, генетических и других биологических свойств выделенных штаммов отобран бес-плазмидный штамм B.subtilis 1719, проявляющий антагонизм против условно патогенных и патогенных микроорганизмов различных таксономических групп, обладающий низкой адгезивной активностью, устойчивый к гентамицину, по-лимиксину и эритромицину.

Экспериментально обоснованы подходы к созданию производственной технологии, включающие изучение ростовых свойств штамма В.subtilis 1719 на оригинальных питательных средах, условий стабилизации его жизнеспособности и антагонистической активности как этапов получения нового препарата-пробиотика.

Подана заявка на изобретение (№2005111301 от 19.04.2005 г.): «Штамм бактерий Bacillus subtilis 1719 - продуцент антагонистически активной биомассы в отношении болезнетворных микроорганизмов, а также протеолитических, амилолитических и липолитических ферментов».

Практическая значимость.

Выделенный и идентифицированный штамм B.subtilis 1719 депонирован в Государственной коллекции культур ГИСК им. JI.A. Тарасевича под №277 и может быть рекомендован для разработки промышленной технологии получения оригинального биотерапевтического препарата-пробиотика.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Выделенные три штамма бактериальных культур по морфологическим, физиолого-биохимическим и другим свойствам соответствуют виду В. subtilis. Они не содержат плазмид , антагонистически активны в отношении условно патогенных и патогенных бактерий разных таксономических групп, имеют низкий или средний уровень адгезии.

2. Штамм B.subtilis 1719 обладает пробиотическими свойствами, проявляющимися в элиминации условно патогенных и патогенных микроорганизмов с восстановлением количественного и качественного состава нормальной микрофлоры при экспериментальном дисбиозе, а также оказывает иммуномодули-рующее действие на макроорганизм.

3. По технологическим характеристикам штамм B.subtilis 1719 можно рекомендовать в качестве кандидата для создания оригинального препарата-пробиотика.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме "Микробиология", Гатауллин, Айрат Гафуанович

1. На основании морфологических и физиолого-биохимических свойств выделенные штаммы идентифицированы как B.subtilis. В препаратах ДНК штаммов B.subtilis плазмид не обнаружено, что, по-видимому, указывает на хромосомный контроль антибиотикорезистентности.

2. На модели дисбиоза белых мышей показана пробиотическая активность штамма B.subtilis 1719, проявляющаяся в элиминации условно-патогенных и патогенных микроорганизмов с восстановлением качественного и количественного состава нормальной микрофлоры.

3. Оптимальной средой для накопления биомассы при культивировании штамма B.subtilis 1719 является среда ВК-2 с добавлением в качестве источника углеводов глюкозы или сахарозы .

4. Установлено, что штамм B.subtilis 1719 сохраняет жизнеспособность и антагонистическую активность в лиофилизированном состоянии с сахаро-зо-желатиновым стабилизатором не менее 4 лет (срок наблюдения), в жидкой форме, стабилизированной 7% раствором NaCl - 2 года, и 1 год в присутствии дистиллированной воды или 10% раствора глицерина.

5. Антагонистически активный, низкоадгезивный , бесплазмидный, нетоксичный штамм B.subtilis 1719, обладающий пробиотической и иммуно-модулирующей активностью, депонирован в Государственной коллекции культур ГИСК им. J1.A. Тарасевича.

6. Штамм B.subtilis 1719 (277) по биологическим свойствами и основным технологическим характеристикам перспективен для использования при разработке новых препаратов-пробиотиков.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Открытия и достижения современной биологической и медицинской науки позволили разработать и внедрить в практику новые биопрепараты - пробиотики. Основу этих лекарственных средств составляют живые микробные культуры. В основе лечебного действия этих препаратов лежит выраженный микробный антагонизм в отношении патогенных и условно патогенных штаммов - возбудителей болезней. В процессе лечения не менее важной является иммуномодулирующая активность пробиотиков. Неоспоримые преимущества препаратов из живых бактерий перед лекарствами, синтезированными химическим путем, это - безвредность, их физиологич-ность для организма человека, отсутствие аллергических реакций,. Уже сейчас пробиотики заняли лидирующие позиции при коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта, нарушениях обмена веществ, лечении последствий антибактериальной, химио-, гормональной и лучевой терапии. В ре зультате исследования феномена транслокации бактерий показано, что пробиотики могут с успехом заменять антибиотики и протеолитические ферменты при профилактике и лечении различных хирургических инфекций.

В последнее десятилетие для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта широко используют биопрепараты на основе живых микробных культур спорообразующих бактерий .

Разнообразие метаболических процессов, генетическая и биохимическая вариабельность, устойчивость к литическим и пищеварительным ферментам , послужили обоснованием использования бацилл в различных областях медицины. Эти микроорганизмы технологичны в производстве, стабиль> ны при хранении и, что существенно важно, экологически безопасны .

Высокая активность у штаммов против одного набора тест - культур не гарантирует его активности против других. В связи с этим использование спорового пробиотика ограничено конкретными лечебными целями. Вариабельность нозологических форм гнойно-септических заболеваний и многообразие этиологически значимых для развития дисбиотических нарушений микроорганизмов определяют требования к используемому биопрепарату. Это побуждает исследователей к постоянному скринингу штаммов-антагонистов с заданными свойствами.

Изученные нами штаммы обладали морфологическими и физиолого-биохимическими свойствами, типичными для представителей В. subtilis, и характеризовались набором ферментов , расщепляющих различные субстраты.

По данным литературы B.subtilis обладают выраженными антагонистическими свойствами в отношении широкого спектра патогенных микроорганизмов и высокой ферментативной активностью, за счет чего нормализуют процессы пищеварения, а также обеспечивают антитоксический и противоаллергический эффект .

Исследованные штаммы B.subtilis имели широкий спектр антагонистической активности, низкий (В. subtilis № 1719) или средний (В. subtilis № 1594, В. subtilis № 1318) уровень адгезии.

Таким образом, изученные нами штаммы характеризовались высокой пробиотической активностью. Однако изучение биохимических свойств показало, что штамм B.subtilis 1719 обладал более высокой ферментативной активностью (протеазной , амилазной, липазной), что выражалось в наибольшей зоне гидролиза исследуемых субстратов . Кроме того, низкий уровень адгезивной активности штамма В.subtilis 1719 и, по-видимому, его природная антибиотикоустойчивость , контролируемая хромосомой, позволили сделать заключение о перспективности дальнейшего изучения этой культуры.

На наш взгляд, перспективы для расширения промышленного выпуска препаратов на основе рода Bacillus очень велики.

Бациллы способны секретировать в культуральную жидкость множество ферментов. Они служат важным промышленным объектом для получения протеолитических и амилолитических ферментов, используемых для производства пищевых продуктов, детергентов и медико-биологических субстанций . В последнее десятилетие с их участием получен ряд новых антибиотиков, бактериальных инсектицидов и других биологически активных веществ .

Несмотря на то, что В. subtilis имеют статус GRAS, в литературе имеются единичные сообщения о наличии факторов патогенности , у некоторых штаммов В. subtilis. Указывается, что это не является постоянным признаком, поскольку исчезает при пересевах . Высказано предположение о взаимосвязи патогенных свойств бактерий с наличием у них плазмид . Например, Le Н. и Anagnostopoulos С. выделили плазмиды из 8 штаммов В. subtilis у 83 обследованных. Плазмидные ДНК были определены только в клетках токсигенных штаммов В. subtilis и не обнаружены в клетках других штаммов одного вида, не обладающих токсигенностью . Элиминация плазмид из токсигенных штаммов под воздействием элиминирующих агентов приводила к устранению токсигенных свойств фильтратов культур. Однако генетическая роль плазмид изучена недостаточно.

В проведенных нами исследованиях, в препаратах выделенной ДНК трех изученных штаммов В. subtilis плазмид не обнаружено.

Авторы, изучавшие воздействие бацилл на организм теплокровных, пришли к заключению, что штаммы В. subtilis совершенно безвредны для человека и животных. Доказательством безвредности для макроорганизма служат экспериментальные данные о том, что уже через несколько дней после парентерального введения, B.subtilis элиминируется из организма . Механизмы лечебного действия этих культур изучали на животных. В настоящее время считают, что терапевтический эффект споровых пробиотиков определяется комплексом факторов, в их числе: продуцирование культурами В. subtilis бактериоцинов , подавляющих рост патогенных и условно патогенных микроорганизмов; синтез высокоактивных ферментов: протеаз , рибонуклеаз, трансаминаз и др.; продуцирование субстанций, нейтрализующих бактериальные токсины.

Изучение свойств выбранного штамма на мышах показало, что он ави-рулентен, не обладает токсичностью и токсигенностью.

Факторами положительного воздействия пробиотиков на макроорганизм являются различные продукты микробного синтеза: аминокислоты, полипептидные антибиотики, гидролитические ферменты и ряд других биологически активных субстанций, имеющих меньшее значение. Поэтому изучение и выделение протективных субстанций, продуцируемых микроорганизмами рода Bacillus, и создание на их основе медико-биологических препаратов является насущной необходимостью .

В желудочно-кишечном тракте проявляется прямое антагонистическое действие бацилл, которое носит преимущественно избирательный характер в отношении патогенных и условно патогенных микроорганизмов. В то же время они характеризуются отсутствием антагонизма в отношении представителей нормальной микрофлоры.

В проведенных нами исследованиях при коррекции экспериментального дисбиоза, индуцированного введением антибиотика доксициклина, культура В. subtilis 1719 способствовала нормализации состава и численности кишечной микрофлоры, а также элиминации условно патогенных микроорганизмов в пристеночной и просветной микрофлоре.

Из литературных данных следует, что производственные штаммы рода Bacillus обладают низким индексом адгезивной активности к эритроцитам и слабой или средней адгезивностью к эпителиальным клеткам кишечника. Штаммы B.subtilis 534 и ЗН имеют больше адгезинов к рецепторам энтеро-цитов, штамм В. licheniformis - к колоноцитам , т.е. у разных штаммов по-видимому, имеются адгезины к рецепторам разных клеток кишечника .

Их активность осуществляется в просвете кишечника и направлена в отношении патогенных микроорганизмов, не оказывая антагонистического действия на представителей нормальной микрофлоры. При приеме споровых пробиотиков реализуется возможность восстановления аутофлоры в различных локусах кишечника, и через 3-5 суток количество лактобактерий, бифи-добактерий, кишечных палочек и др. увеличивается, а затем восстанавливается до нормальных показателей .

Результаты проведенных нами исследований по изучению адгезии микроорганизмов на энтероцитах, позволяют с большей вероятностью утверждать, что адгезивная способность клеток кишечника зависит от количественного и качественного состава нормальной микрофлоры. При дисбиоти-ческих состояниях происходит открытие рецепторов на поверхности энтероцитов, на которые прикрепляются условно патогенные и патогенные микроорганизмы, а при коррекции дисбиоза происходит колонизация кишечника нормальной микрофлорой и происходит уменьшение количества рецепторов энтероцитов, способных адгезировать на своей поверхности неиндигенные микроорганизмы.

Известно, что нормальная микрофлора играет важную пусковую роль в механизме формирования иммунитета и специфических защитных реакций в постнатальном развитии макроорганизма .

Роль микрофлоры в развитии иммунного ответа обусловлена ее универсальными иммуномодулирующими свойствами, которые включают им-муностимуляцию и иммуносупрессию. Установлено, что бактериальные ли-пополисахариды (ЛПС ) оказывают иммунорегулирующее действие на Ig А -иммунный ответ и играют роль адъювантов. Микрофлора обеспечивает развитие комплекса неспецифических и специфических иммунологических реакций, формируя адаптационно-защитные механизмы .

Какой бы высокой антимикробной активностью не обладало лекарственное средство, решающая роль в ликвидации инфекционного патологиче ному статусу. Создание препаратов, эффективных по антимикробным показателям и стимулирующих реакции иммунитета, представляется важной задачей. Поэтому большое количество исследований направлено на изучение влияния препаратов - пробиотиков на разные звенья иммунной системы человека и животных.

Введение живых культур аэробных бацилл заметно стимулирует in vivo продукцию сывороточного интерферона и интерферона, индуцированного in vitro вирусом болезни Ньюкастла .

В ряде работ указывается на то, что препараты - пробиотики оказывают иммуномодулирующее действие, восстанавливая нарушенный патологией иммунный статус, увеличивая продукцию эндогенного интерферона, усиливая функциональную активность макрофагальных клеток, повышая фагоцитарную активность лейкоцитов крови - моноцитов и нейтрофилов .

Нашими исследованиями показано, что культура В. subtilis 1719 достоверно изменяла метаболическую активность нейтрофилов при коррекции дисбиоза и не вызывала изменений функциональной активности нейтрофилов при нормальном состоянии индигенной микрофлоры. Кроме того, установлено, что дисбиоз сопровождался повышением уровня ФНО-а, что свидетельствовало о выраженной фагоцитарной, цитотоксической, адгезивной активности макрофагов, лимфоцитов, а также клеток эндотелия и эпителия тонкой кишки.

Повышенная секреция провоспалительного цитокина у мышей с дис-биозом, вероятно, отражает активацию иммунокомпетентных клеток (Т-лимфоцитов, моноцитов/макрофагов). Под влиянием культуры B.subtilis 1719 * наблюдали снижение продукции ФНО-а. Введение культуры интактным животным, изменений уровня продукции ФНО-а не вызывало.

Учитывая, что ФНО-а является маркером воспалительных реакций, сделан вывод о важной роли пробиотика в повышении противовоспалительной активности иммунокомпетентных клеток у животных.

Проведенные исследования по изучению динамики продукции цитоки-нов под влиянием штамма B.subtilis 1719 показали, что культура не оказывала влияния на продукцию цитокинов в первые часы после введения, кроме IL-lp, количество которого накапливалось постепенно. Уровень других изученных цитокинов (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-y) значительно возрос в интервале от 12 до 24 ч.

Таким образом, модуляция клеток иммунной системы и изменение потенциала цитокинов может быть одним из механизмов, посредством которого культура В. subtilis 1719 способствует коррекции дисбиоза.

Анализ результатов научных исследований, проводимых у нас в стране и за рубежом, свидетельствует о масштабах использования бактерий рода Bacillus для получения продуктов из биомассы бактерий или их метаболитов. Известные способы культивирования бактерий рода Bacillus являются основой для технологии получения ряда бактериальных и ферментных препаратов. .

При изучении ростовых свойств культуры В. subtilis 1719 на различных жидких питательных средах, установлено, что для максимального накопления биомассы наиболее адекватным субстратом для культивирования штамма можно считать среду ВК-2 с добавлением глюкозы или сахарозы

В настоящее время при отборе и характеристике производственных культур микроорганизмов учитываются, главным образом, следующие показателя биологической характеристики: спектр и уровень антагонистической активности, технологичность, т.е. способность к быстрому накоплению био* массы, устойчивость к лиофильному высушиванию, жизнеспособность при хранении. Особое внимание уделяется критериям степени безопасности используемых микроорганизмов для здоровья человека .

В проведенных исследованиях по оценке жизнеспособности микробных клеток B.subtilis 1719 при хранении в присутствии жидких стабилизаторов выявлено, что оптимальным стабилизатором является 7% раствор NaCl, который позволял сохранять жизнеспособность и антагонистические свойства штамма в течение 2 лет. Для сохранения свойств культуры в течение 1,5 лет возможно использование 10% раствора глицерина, 1 года - дистиллированной воды, при этом установлено, что указанные наполнители, статистически значимых влияний на антагонистические свойства штамма B.subtilis 1719 не оказывали. Необходимо отметить, что важным фактом является способность штамма B.subtilis 1719 сохранять антагонистическую активность в отношении S.sonnei и S.aureus в жидких стабилизаторах длительный срок -36 мес. (срок наблюдения).

Лиофильное высушивание с сахарозо-желатиновым стабилизатором сохраняло жизнеспособность и антагонистическую активность штамма B.subtilis 1719 в течение 4 лет (срок наблюдения).

В настоящее время в практическом здравоохранении широко используют известные препараты - пробиотики: бактисубтил , споробактерин, биоспорин, бактиспорин, субалин, цереобиоген , энтерогермин и другие

Сравнительное изучение штамма B.subtilis 1719 по антагонистической и адгезивной активности с коммерческими культурами следующих пробиоти-ческих препаратов: Споробактерин, Россия (В. subtilis 534), Цереобиоген, Китай {В.cereus DM423), Субтил, Вьетнам {В.cereus var. vietnami), Бактисубтил, Франция (B.cereus IP5832), Нутролин, Индия (B.coagulans), показало, что выделенный штамм является оригинальным и может быть рекомендован в качестве производственного, при получении нового препарата-пробиотика.

Таким образом, по физиолого-биохимическим свойствам штамм B.subtilis 1719 имеет четко различимые индивидуальные признаки, занесенные в паспорт культуры при депонировании в коллекции культур ГИСК им. JI.A. Тарасевича. Кроме того, доминирующее положение выделенного штамма B.subtilis 1719 по антагонистической активности свидетельствует о перспективности использования этой культуры для разработки на его основе пробиотического препарата.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гатауллин, Айрат Гафуанович, 2005 год

1. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Медизд, 1962, 180 с

2. Байбаков В.И., Карих Т.Л., Борукаева Л.А. и др. Нормализация кишечной микрофлоры и общего состояния мышей линии JCR под влиянием концентрата бифидобактерий.//Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т. 42, №3. - С. 20-24.

3. Байда Г.Е., Бударина Ж.И. Первичная структура и анализ гена гемолизина II Bacillus cereus // 2 Откр. гор. науч. конф. мол. Ученых г. Пущино , 23-25 апр. 1997: Тез. докл. Пущино. - 1997 - С. 45-46.

4. Байда Г.Е., Кузьмин Н.П. Ген HLY-III Bacillus cereus, клонированный в Escherichia coli, кодирует новый поро-формирующий гемолизин // Междун. конф. посвящ. памяти акад. А.А.Баева: Тезисы докл., Москва, 20-22 мая 1996. М. - 1996. - С. 108, 291.

5. Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечни-ка//СПб. «Питер ». -2000. -209 с.

6. Баханова Е.М., Николаев С.М., Николаева И.Г., и др. Раст. ресурсы. 2001 . Т. 37, вып. 1. С. 70-76. Влияние экстракта из побегов Pentaphylloides fruticosa на течение экспериментальных дисбактериозов кишечника, вызванных сульфадиметоксином и изониазидом

7. Белявская В.А., Сорокулова И.Б., Ильичев А.А. Перспективы конструирования иммунопрепаратов на основе рекомбинантных бацилл // Новые направления биотехнологий: Тез. док. YI Конф. РФ, 24-26 мая, 1994. Пущино. -1994.-С. 68.

8. Белявская В.А., Сорокулова И.Б., Масычева В.А. Рекомбинантные пробио-тики: проблемы и перспективы использования для медицины и ветеринарии // Дисбактериозы и эубиотики: Тезисы докладов Всеросссийской научно-практической конф. М. - 1996. - С. 7.

9. Белявская В.А., Чердынцева Н.В., Бондаренко В.М., и др. Биологические эффекты интерферона, продуцируемого рекомбинантными бактериями препарата пробиотика Субалина. Журн. микробиол ., 2003, №2, с. 102-109.

10. Беляев Е.И. Пути усовершенствования препаратов, нормализующих микрофлору кишечника / Респ. сборник научных трудов: «Аутофлора человека в норме и патологии. Горький. - 1988. - С. 74-78.

11. Билибин А. Ф. //Тер. арх. -1967. № 11. - С. 21-28.

12. Билибин А. Ф. // Клин. Медицина. 1970. - № 2. - С. 7-12.

13. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам обследования. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. М.: Медицина, 1982. - С. 180.

14. Блинкова Л.П., Семенов С.А., Бутова Л.Г. и др. Антагонистическая активность свежевыделенных штаммов бактерий рода Bacillus // ЖМЭИ. 1994. -N5.-С. 71-72.

15. Бойко Н.В., Туряница А.И., Попович Е.П., Вьюницкая В.А. Антагонистическое действие культур Bacillus subtilis на бактерии рода Klebsiella / Микробиол. ж. 1989. - Т. 51, N 1. - С. 87-91.

16. Бойко Н.В., Лисецька М.В. Розробка пробютиюв виб1рковощн: Протискле-ромна ефектившсть деяких штам1в В. subtilis // Наук. вюн. Ужгор. ун-ту. Сер. Бюл. 1997. - N 4. - С. 194-198.

17. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры // Вестник РАМН . -М.- 1997.-N3.-C. 7-10.

18. Бондаренко В.М., Чупринина Р.П., Аладышева Ж.И., Мацулевич Т.В. Пробиотики и механизмы их лечебного действия // Эксперим. и клин, гастроэн-терол. 2004. № 3. С. 83-87.

19. Бочкарева Н.Г., Белогорцев Ю.А., Удалова Э.В. и др. Штамм бактерий Bacillus subtilis продуцент комплекса гидролитических ферментов , обогащенных b-глюканазой // Пат. N 2046141 Россия, С12 N 9/42, Опубл. 20.10.95. - Бюл. N 29.

20. Брилис В.И. Адгезивные свойства лактобацилл //Автореф. дис. канд. мед. наук. Тарту. -1990. - 25 с.

21. Брилис В.И., Брилине Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. Адгезивные и ге-магглютинирующие свойства лактобацилл . Журн. микробиол., 1982, 9: 7578.

22. Васильева В.Л., Тацкая В.Н., Резник С.Р. Опыт применения растительного и микробного адъювантов при получении иммунных асцитных жидкостей у лабораторных животных // Мжробюл. журн. 1974. Т. 36, N 3. - С. 358-360.

23. Вершигора A.E. Основы иммунологии // Киев: Вища школа. 1975. - 319 с.

24. Винник Ю.С., Перьянова О.П., Якимов С.В. и др., Метод лечения гнойных ран с использованием антагонистов / International journal on immunorehabilitation. 1998. - N 4., С. 143.

25. Виноградов Е.Я., Шичкина В.П. Штамм бактерии В. mucilaginosus в качестве продуцента биостимулятора неспецифического иммунитета у телят // А.с. 1210452, СССР -1/00. Опубл. 27.04.96. - Бюл. N 12.

26. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П.Итоги науки и техники: Биофизика 1989; 24: 172.

27. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дисбакте-риозы актуальная проблема медицины //Вестник АМН . -1997. - № 3. -С.3-9.

28. ВоробьевА.А., Несвижский Ю.В., Зуденкова А.Е., Буданова Е.В. Сравнительное изучение пристеночной и просветной микрофлоры толстой кишки в экспериментах на мышах . Журн. микробиол., 2001, 1: 62-67.

29. ВоробьевА.А., Несвижский Ю.В., Липницкий Е.М. и др. Исследование пристеночной микрофлоры кишечника человека. Журн. микробиол., 2003, 1: 6063.

30. Вьюницкая В.А., Бойко Н.В., Спивак Н.Я., Ганова Л.А./ Некоторые механизмы действия новых микробиотиков // Микробиологические и биотехнологические основы интенсификации растениеводства и кормопроизводства: Сборник тезисов Алма-Ата, 1990. - С. 17.

31. Галаев Ю.В. Патогенные ферменты бактерий // М.: Медицина. 1968. - 115 с.

32. Гончарова Г.И., Семенова А.П., Лянная A.M., и др. Количественный уровень бифидофлоры в кишечнике и его коррелятивная связь с состоянием здоровья человека.// Антибиотики и микроэкология человека и животных. -1988.-С.118—123

33. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции.//Диссертация в форме научного

34. Грачева Н.М., Гончарова Г.И. и др. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение при дисбактериозе кишечника. Методические рекомендации. 1986, С. 23

35. Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Аваков А.А. и др. - Новые лекарственные препараты. 1994, №1, С. 3-12

36. Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И. и др. Эффективность нового бактерийного препарата биоспорина при лечении острых кишечных инфекций // Журн. микробиол. 1996. - N 1. - С. 75-77.

37. Гребнева A.J1., Мягкова Л.П. Кишечный дисбактериоз//Руководство по гастроэнтерологии в 3 т. М., 1996. -Т.З. -С.324-334

38. Григорьева Т.М., Кузнецова Н.И., Шагов Е.М. Штамм Bacillus thuringiensis 4КН, синтезирующий экзотоксин со специфической активностью против колорадского жука// Биотехнология. 1994. - N 9-10. - С. 7-10.

39. Гулько М.А., Казаринова JI.A., Позднякова Т.М. Способ получения инозина // Пат. N 175583, С12Р 19/32. Опубл. 30.08.94. - Бюл. N 16.

40. Демьянов А.В., Котов А.Ю., Симбирцев А.С., Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в клинической практике. Журнал Цитоки-ны и воспаление, 2003, Т. 2, № 3, с. 20-35

41. Егоров Н.С., Зарубина А.П., Выборных С.Н., Ландау Н.С. Синтетическая * среда для выращивания бактерий рода Bacillus // Вестник МГУ . 1989. N 4.1. С. 52.

42. Ермакова Л.М., Смирнова Т.А., Алиханян С.И. и др., Кристаллические включения у мутанта Bacillus subtilis с измененным спектром протеиназ // Докл. АН СССР. 1977. - Т. 236, N 4. - С. 1001-1003.

43. Жирков И.Н., Братухин И.И. Применение пробиотика РАС для коррекции дисбактериозов у телят// Ветеринария. 1999. N 4. - С. 40-42.

44. Згонник В.В., Фуртат И.М., Василевская И.А. и др. Антагонистические свойства спорообразующих бактерий, контаминирующих процесс производства лизина//Микробиол. ж. 1993. -Т.55, N4. - С. 53-58.

45. Зинкин В.Ю. Фотометрический НСТ-тест с нейтрофилами крови человека и его клинико-иммунологическая значимость у больных с травмой опорно-двигательного аппарата. Автореф. дис. канд. мед. наук.- Москва, 2004.

46. Зуденков А.Е. Микрофлора и состав иммунокомпетентных клеток пристеночного муцина толстой кишки в норме и при некоторых патологических состояниях. Автореф. дис. канд. мед. наук,- Москва, 2001.

47. Ивановский А.А., Новый пробиотик бактоцеллолактин при различных патологиях у животных // Ветеринария. 1996 - N11. - С. 34-35.

48. Ивановский А.А., Вепрева Н.С., Зимирева В.В., Лагунова О.П. Способ получения пробиотика для ветеринарии / RU Патент N 2084233, опубл. 20.07.97. Бюл. N 20.

49. Кандыбин Н.В., Ермолова В.П., Смирнов О.В. Итоги и перспективы применения бактокулицида // Совр. достиж. биотехнол.: Матер. 1 Конф. Сев.-Кавк. региона, Ставрополь, сент. 1995. Ставрополь. - 1995. - С. 14-15.

50. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры.//Русский медицинский журнал. 2000. - Т. 8, №13-14. - С. 572-575.

51. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Рубакова Э.И. Система цитокинов. М., 2000.

52. Козачко И.А., Вьюницкая В.А., Бережнизкая Т.Г. и др. Бактерии рода 4 Bacillus перспективные культуры для создания биологических средств защиты растений от болезней.// Мшробюл. ж. - 1995.- Т.57, N 5. - С. 69-78.

53. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника. М., 1979. -198 с.

54. Кудрявцев В.А.,Сафронова JI.A., Осадчая А.И. и др. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма // Мик-робиол. ж. 1996 - Т.58, N 2. - С. 46-53.

55. Кузнецова Н.И., Смирнова Т.А., Шамшина Т.Н. и др. Штамм Bacillus thuringiensis, токсичный для комнатной мухи // Биотехнология. 1995. -N3-4.-С. 11-14.

56. Лапчинская А.В., Шендеров Б.А. Коррекция дисбактериозов, вызванных цефалексином, некоторыми иммуномодуляторами.//Медицинские аспекты микробной экологии. М., 1991. -С.70—79

57. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.Т., Микельсаар М.Э. с соавт. Лактофлора и колонизационная резистентность.//Антибиотики и мед. биотехнология. -1987. -32. -№3. -С. 173-180.

58. Лещенко В.М. Клиника, диагностика и лечение висцерального кандидамикоза . Методические рекомендации. М., 19871.

59. Лисецька М.В. Експериментальне визначення антагонютичжм активносп штам1в Bacillus subtilis щодо Klebsiella rhinoscleromatis // Наук. вюн. Ужгор. ун-ту. Сер. Бюл. 1997. - N 4. - С. 207-212

60. Лопатина Т.К. с соавт. Иммуномодулирующее действие препаратов* эубиотиков //Вестник РАМН. М., «Медицина ». -1997. №3. -С.30-34

61. Лукин А.А. Антибиотикообразование и споруляция у плазмидных и бес-плазмидных микроорганизмов // Пущино. 1978. - С. 25-28.

62. Мазанкова JI.H., Михайлова Н.А., Курохтина И.С. и др. Бактиспорин новый пробиотик для лечения острых кишечных инфекций у детей// Человек и лекарство: Тез. докл. V Российского Национального Конгресса, Москва, 8-12 апреля 1997г. - М. - С. 199.

63. Мазанкова Л.Н., Ваулина О.В. Новые лекарственные средства для коррекции дисбиотических нарушений.//Детский доктор. 2000. №3. - С. 51-53.

64. Маниатис Т., Френч Э., Сэмбрук Дж. Методы генной инженерии. Молекулярное клонирование, 1984.

65. Марков И.И., Жданов И.П., Марков А.И. Штамм Bacillus subtilis МЖ-6 антагонист микобактерий туберкулеза // Пат. N 2120992, С 12N 1/20. - Опубл. 27.10.98.-Бюл.N30.

68. Микшис Н.И., Шевченко О.В., Еремин С.А. и др., Популяционная гетерогенность штаммов Bacillus anthracis II Деп. в ВИНИТИ 04.06.98. Саратов. -1998.-7 с.

69. Митрохин С.Д. // Антибиотики и химиотерапия. 1991. - № 8. - С.46 - 50.

70. Митрохин С.Д. Метаболиты нормальной микрофлоры человека в экспресс-диагностике и контроле лечения дисбиоза толстой кишки: Автореферат дис. д-ра мед. наук, М., 1998. 37 с.

71. Митрохин С.Д., Ардатская М.Д., Никушкин Е.В., Иваников И.О. и др. - М., 1997. 45 с. Комплексная диагностика, лечение и профилактика дисбакте-риоза (дисбиоза) кишечника в клинике внутренних болезней (Методические рекомендации).

72. Митрохин С.Д., Шендеров Б.А.Микробиологические и биохимические показатели изменения микробной экологии толстой кишки крыс под влиянием рифампицина. Антибиотики и химиотерапия - 1999, Т. 34 № 6 (482-4).

73. Молчанов O.JL, Позняк A.JI. Применение биоспорина в комплексной терапии бактериального вагиноза // Тез. докл: Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней. Санкт-П. - 1999 г. С. 187.

74. Музыченко JI.A., Сенаторова В.Н., Альховская JI.JI. и др. Морфометрический анализ развития микроорганизмов / Биотехнология. 1990. - N 3. - С. 3-6.

75. Мюллер Г., Литц П., Мюнх Г. Микробиология пищевых продуктов растительного происхождения// М.:Б.и..- 1977.- С.343 347

76. Никитенко В.И. Бактериальный препарат для профилактики и лечения вос-«. палительных процессов и аллергических заболеваний // Международная заявка. N 89/09607, WO, публ. 19.10.1989.

77. Никитенко В.И. Вместо лекарств бактерии // Наука в СССР. - 1991. - N 4. -С. 116-121.

78. Никитенко В.И. Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для получения молочного продукта, предназначенного для лечения диатеза, дисбак-териоза и бактериальных инфекций // А.с. N 1648975, S.U. публ 15.05. 91.

79. Никитенко В.И., Никитенко И.К. Штамм бактерий Bacillus pulvifaciens, используемый для изготовления лечебно-профилактического препарата против бактериальных инфекций у животных // А.с. N 1723117, S.U. публ. 12. 1992.

80. Никитенко В.И., Никитенко И.К. Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для получения препарата для профилактики и лечения противовоспалительных процессов и аллергических заболеваний // А.с. N 1723116, S.U. опубл. 12. 1992.

81. Никитенко Л.И., Никитенко В.И. Штамм бактерий Bacillus sp. компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергии // А.с. N 1710575, S.U. - публ. 5. 1992.

82. Никитенко В.И., Горбунова Н.Н., Жигайлов А.В. Споробактерин новый препарат для лечения дисбактериозов и гнойно-воспалительных процессов // Дисбактериозы и эубиотики: Тезисы докладов Всерос. научно-практ. конф. -М.- 1996.-С. 26.

83. Николичева Т.А., Тараканов Б.В., Голинкевич Е.К., Комкова Е.Е. Изменение биоценоза пищеварительного тракта поросят при включении в рацион Bacillus micilaginosis // Бюл. ВНИИ физиол., биохимии и питания с-х животных. 1989.-N 2. - С. 31-35.

84. Обухова О.В., Соболева Н.Н. О наличии фактора распространения в культурах сапрофитных споровых бактерий // Журн. микробиол. 1950. - N 12. С. 482-485.

85. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические рекомендации МУК 4.2.1980-04, 2004.

86. Осадчая А.И., Кудрявцев В.А., Сафронова JI.A. Влияние кислотности среды и температуры на рост и экскрецию полисахаридов Bacillus subtilis при глубинном культивировании // Мисробюл. журн. 1998. - Т. 60., N 4. - С. 25-32.

87. Осипова И.Г. Некоторые аспекты механизма защитного действия колибак-терина и споровых эубиотиков и новые методы их контроля.// Автореф. дис.канд.биол.наук.- М., 1997.- 25 с.

88. Осипова И.Г., Сорокулова И.Б., Терешкина Н.В., Григорьева JI.B. Изучение безопасности бактерий рода Bacillus, составляющих основу некоторых про-биотиков // Журн. микробиол. 1998. - N 6. - С. 68-70.

89. Осипова И.Г., Михайлова Н.А., Сорокулова И.Г., Васильева Е.А., Гайде-ров А.А. Споровые пробиотики. Журн. микробиол. - 2003. №3. с. 113-119.

90. Остерман Л.Д. Методы Исследования белков и нуклеиновых кислот. 1981.

91. Панин А.Н., Серых Н.И., Малик Е.В. и др. Повышение эффективности пробиотикотерапии у поросят/ Ветеринария, 1996. - N 3. - С. 17.

92. Панчишина М.В., Олейник С.Ф. Дисбактериоз кишечника. Киев, 1983

93. Паршина С.Н., Имшенецкий А.А., Нестерова Н.Г. и др. Штамм бактерий Bacillus сегеш"-продуцент протеолитических ферментов с тромболитическим действием // А. с. N 1615177, С 12N 1/20. Опубл. 23.12.90. - Бюл. N 4. 1988.

94. Перт С. Д. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М. Мир, 1978, 332 с

95. Петров Л.Н., Вербицкая Н.Б., Вахитов Т.Я. Конструирование препаратов для лечения и профилактики дисбактериоза на основе представлений о эндо-экологии человека // Рус. ж. Вич/Спид и родст. пробл. 1997.- Т. 1, N 1. С. 161-162.

96. Петровская В.Г., Марко О.П. Микрофлора человека в норме и патологии. М.:Медицина. -1976. -217 С.

97. Поберий И.А., Харечко А.Т., Садовой Н.В., Литусов Н.В. Новый комплексный эубиотик «биоспорин » для детей и взрослых / Здравоохранение Башкортостана. 1998. -N 1. - С. 97-99.

98. Погосян Г.П., Надирова А.Б., Калиев А.Б., Карабаев М.К. Плазмида pCLl и антимикробная активность штамма Bacillus sp. 62 II Молекулярная генетика, микробиол. и вирусология. 1999. - N 1. - С. 37-38.

99. Подберезный В.В., Париков В.А. Среда для культивирования бактерии-симбионта Bacillus pulvifaciens или Bacillus subtilis - продуцента пробиоти-ка// RU Патент № 2100029, опубл. 27.12.97. Бюл.№36.

100. Подберезный В.В., Полянцев Н.И., Ропаева Л.В. Культивирование производственных штаммов Bacillus subtilis в подсырной сыворотке // Ветеринария.- 1996.-N 1.-С. 21-29.

101. Подопригора Г.И. Иммунные и неспецифические механизмы колониза-ционнной резистентности.//Антибиотики и колонизационная резистентность/Груды ВНИИ антибиотиков.- М. -1990. -вып.Х1Х. -С. 15-25.

102. Полховский В.А., Буланов П.А. О декарбоксилазах аминокислот у Bacillus cereus //Микробиология. 1968. - Т. 37, N 4. - С. 600-604.

103. Поспелова В. В., Грачева Н.М., Антонова Л. В. и др. Биологические микробные препараты, их лекарственные формы и сферы применения //Новые лекарственные препараты: Экспресс информация. -1990. -Вып. 5. - С. 1-8.

104. Поспелова В.В., Рахимова Н.Г., Халенева М.П. и др. Новые сферы применения микробных биопрепаратов для коррекции бактериоценоза организма человека.//Иммунобиол. препараты. М. -1989. -С. 142-152.

105. Резник С.Р. Способ лечения и профилактики вирусных и бактериальных заболеваний животных // SU, А.с. N 1311243, опубл. 1982.

106. Резник С.Р., Сорокулова И.Б., Вьюницкая В.А. и др. Профилактический биопрепарат споролакт // Патент N 2035186. RU. - А 61 К 35/66, публ. 20.05.95, бюл. N 14.

107. Резник С.Р., Шуст И.И. Гематологические и цитохимические показатели телят при даче препарата Бактерии- SL // Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа: Тез. докл. Всесоюзн. симпоз. -Киев, 1989. С. 25.

108. Решедько Г.К., Стецюк О.У. Особенности определения чувствительности микроорганизмов диско-диффузным методом. Современные методы клинической микробиологии, выпуск 1. Смоленск, 2003.

109. Ряпис JI.A., Липницкий А.В. Микробиологические и популяционно-генетические аспекты патогенности бактерий // Журн. микробиол. 1998. - N 6. С. 109-112.

110. Савицкая К.И. Нарушения микроэкологии желудочно-кишечного тракта и хронические болезни кишечника // Terra medica. - 1998. N 2. - С. 13-15.

111. Свечникова Е.Б., Максютова Л.Ф., Хунафин С.Н. и др., Опыт использования бактиспорина в комплексном лечении детей с термической травмой // Тез. докл: Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней. Санкт-П. - 1999 г. - С. 268.

112. Синев М.А., Бударина Ж.И., Гавриленко И.В. и др., Доказательство существования гемолизина II Bacillus cereus: клонирование генетической детерминанты гемолизина II // Молек. биол . 1993. - Т. 27, N 6. - С. 1218-1229.

113. Слабоспицкая А.Т., Крымовская С.С., Резник С.Р. Ферментативная активность бацилл , перспективных для включения в состав биопрепаратов // Микробиол. ж. 1990. - N2. - С. 9-14.

114. Смирнов В.В.,Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. - Киев, 1982 - 280 с.

115. Смирнов В.В. Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных // Киев, 1983. -49 с.

116. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии - продуценты биологически активных веществ// Киев. Нау-кова думка.- 1983.- 278 с.

117. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. и др. О некоторых механизмах возникновения бессимптомной бактеремии // Микробиол. журн. 1988 -Т. 50,N6.-С. 56-59.

118. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. и др. Способ лечения гнойно-септических послеродовых заболеваний суспензией живых культур // А. с. N 1398868 S.U. - А 61 К 35/74. - публ. 30.05.88, бюл. N 20.

119. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. и др. Препарат биоспорин для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека // А. с. N 1722502. S.U. - А 61 К. 39/02, публ. 30.03.92.

120. Смирнов В.В.,Резник С.Р., Сорокулова И.Б., Вьюницкая В.А Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных // Микробиол. журн. 1992. - Т.54, N 6.- С. 82-92.

121. Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.А., и др. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода BacillusII Микробиол. журн.- 1993.- 55,- № 4.С.92—112

122. Смирнов В.В., Осадчая А.И., Кудрявцев В.А., Сафронова JI.A. Рост и спорообразование Bacillus subtilis в различных условиях аэрации // Микробиол. журн. 1993. - Т. 55, N 3. - С. 38-44.

123. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. и др. Профилактический биопрепарат субалин // Патент N 2035185, RU. А 61 К 35/66, публ. 20.05.95, бюл. N 14.

124. Смирнов В.В., Сорокулова И.Б., Осипова И.Г. Биопрепарат субтикол для профилактики и лечения инфекционных болезней // Патент N 2129432. -А. 61 К 35/74. - Бюл. N 12, опубл. 27.04.99.

125. Смирнов В.В., Рева О.Н., Вьюницкая В.А. Создание и практическое применение математической модели антагонистического действия бацилл при конструировании пробиотиков // Мшробюлопчний журн. 1995. -Т. 64, N 5. -С. 661-667.

126. Смирнов В.В., Косюк И.В. Адгезивные свойства бактерий рода Bacillus-компонентов дробиотика // Мшробюлопчний журн. 1997. - Т. 69, N 6. - С. 36-43.

127. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов // Антибиотики и химиотерапия. -1996. Т.41, N 10. - С. 13-15.

128. Сорокулова И.Б. Сравнительное изучение биологических свойств био-спорина и других коммерческих препаратов на основе бацилл // Мшробю-лопчний журнал. 1997. - Т. 69, N 6. - С. 43-49.

129. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов / Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т. 43, N 2. - С. 20-23.

130. Сторожук П.Г., Быков И.М., Сторожук А.П. Патогенетическая направленность белкового питания и заместительной ферментотерапии при имму-нодефицитных состояниях организма // International journal on immunorehabilitation. 1998. - N 10., С. 110-115.

131. Таболин В.А., Бельмер С.В., Гасилина Т.В. и др. Рациональная терапия дисбактериоза кишечника у детей. Методические рекомендации. М., 1998. -11с.

132. Топчий М.П. Применение препаратов из живых культур сенной палочки при дисбактериозах у телят: Автореф. дис. канд. биол. наук. Минск, 1997. -21 с.

133. Тришина Н.В. Связь между развитием дисбактериоза кишечника и состоянием антиэндотоксинового иммунитета. Автореф. дис. канд. мед. наук. -Москва, 2003., 24 с.

134. Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. М 1978; 175.).

135. Фазылова А.А. Клинико-иммунологическое обоснование применения споробактерина и бактиспорина при дисбиозе кишечника у детей раннего возраста // Авт. кан. дис. Уфа. - 1998. - 24 с.

136. Харвуд К. Бациллы . Генетика и биотехнология. М., 1992. - С. 52.

137. Харченко С.Н., Резник С.Р., Литвин В.П. Способ борьбы с плесневением кормов // А.с. N 751382, СССР., опубл. в Б.И., 1980, N 28.

138. Хмель И.А., Чернин Л.С., Леванова Н.Б. и др. Штамм бактерий Bacillus pumilus для получения препарата против фитопатогенных микроорганизмов // Патенты 1817875 Россия F01N 63/00, C12N 1/20. опубл. 20.05.95. - Бюл. N 14.

139. Чернякова В.И., Береза Н.М., Селезнева С.И. Бактериологическая и иммунологическая эффективность препарата биоспорина при неспецифическом язвенном колите // Микробиол.ж. 1993. - Т. 55, N 3. - С. 63-67.

140. Чхаидзе И.Г., В.Г. Лиходед, и др. Корректирующее действие антител при экспериментальном дисбактериозе // Журн. Микробиол. 1998, №4: 12-14.

141. Шарп Р., Скавен М., Аткинсон Т. Бациллы: Генетика и биотехнология. -М. 1992. - 398 с.

142. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса//Вопр.питан. -1999. -Т.68. -№2. -С.32

143. Шендеров Б. А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.-М., 1998, Т. I, С. 287.

144. Шендеров Б.А. Колонизационная резистентность и химиотерапевтиче-ские и антибактериальные препараты.// Антибиотики и колонизационная резистентность: Труды ВНИИ антибиотиков. М. -1990. -вып.Х1Х. -С.5-16.

145. Шендеров Б.А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б., Скиба Н.Э. Пробиотики и функциональное питание // Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т. 42, N 7. - С.30-34.

146. Шендеров Б.А.Медицинская микробная экология и функциональное питание.-М., 1998, Т. II, С. 413

147. Ямпольская Т.А., Великжанина Г.А., Жданова Н.И. и др. Штамм бактерий Bacillus subtilis продуцент L-фенилаланина: А.с. N 1693056, С 12 Р 13/22, опубл. 23.11.91. Бюл. N 43.

148. Adami A., Sandrucci A., Cavazzoni V. Piglets fed froom birthwith the probi-otic Bacillus coagulans as additive: Zootechnical and microbiological aspects // Ann. microbiol. ed enzimol. 1997. - V. 47, N 1. - P. 139-149.

149. Azuma I., Sugimura C., Iton S. Adjuvant activity of bacterial glycolipids // Jap. J. Microbiol. 1977. - V. 20, N 5. - P. 465-468.

150. Benedettini J. et al. Immunomodulation by Bacillus subtilis spores // Boll. 1st, SieroteMilan. 1983.-V. 62.,N6.-P. 509-516.

151. Berkel H., Hadlok R. Lecithinase-und Toxinbildung durch Stamme der Gat-tung Bacillus // Lebensmittelhygiene. 1976. - V. 27, N 2. - p. 63-65.

152. Bernheimer A., Avigad L. Nature and Properties of Cytolytic Agent produced by Bacillus subtilis // J. Gen. Microb.- 1970. V. 61, N 2. - P. 361-369.

153. Blaznic J, Kumel I.M., Salamum B. et al. Sdravljenje kronicne granulomotozne bolezni z acidofilnem mlecom // Zdrav.Vesth. 1976. N 45. - P. 77-79.

154. Boer A.S., Priest F., Diderichsen B. On the industrial use of Bacillus licheni-formis: A review // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1994. - V. 40, N 5. - P. 595-598.

155. Buchell M.E., Smith J., Lynch H.C. A phisiological model for the control of erytromycin production in batch and cyclyc fed batch cuiture // Microbiology. -1997. V. 143, N 2. - P. 475-480.

156. Cipradi G. et al. Effects of an adjunative treatment with Bacillus subtilis for foodallergy // Chemioterapia. -1986. 5, N6. -P.408-410

157. Cromwick A.M., Birrer G.A., Gross R.A. Effects of pH and aeration on y-poly (glutamic acid) formation by bacillus licheniformis in controlled batch fermentor cultures // Biotechnol. and Bioeng. 1996. - V. 50, N 2. - P. 222-227.

158. Danchin A., Glasser P., Kunst F. et al. Bacillus subtilis devoile ses genes // Biofutur. 1998. - N 174. - P. 14-17.

159. Devin K.M. The Bacillus subtilis genome project: Aims and progress // Trends Biotechnol. 1995. - V. 13, N 6. - P. 210-216.

160. Donovan W.P., Rupar M.J., Slanei A.C. Bacillus thuringiensis crytic, protein toxic to coleopteran isects // Патент N 5378625 США A61K 31/00. Опубл. 03.01.95.

161. Dubos R. Toxic factors in enzymes used in laundry products // Science. 1971. - N 3993. - P. 259-260.

162. Edlund C., Nord C.E. Effect of qinolones on intestinal ecology. Drugs, 1998, 58(2): 65-70.

163. Flindt M. Pulmonare disesase due to ingalation of derivates of Bacillus subtilis containing proteolytic enzyme // Lancet.- 1969. V. 1, N 7607. - P. 1177-1181.

164. Fox M. The phylogeny of procaryotes// Science. -1980. V. 209, N 4455. P. 457-463.

165. Fuller R. J Appl Bacteriol 1989; 66: 5: 365-378.

166. Gastro G.R., Ferrero M.A., Abate C.M. et al. Simultaneous production of alpha and beta amylases by Bacillus subtilis Mir-5 in batch and continuous culture // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14, N 1. - P. 49-54.

167. Glatz B.A., Spira W.M., Goepfert J.M. Alteration of vascular permeability in rabbits by culture filtrates of Bacillus cereus and related species // Infect, and Immunol. 1974. V. 10, N 2. - P. 299-303.

168. Guida V., Guida R. Importansia dos Bacillos esporulados aerobios em gastroenterologia e nutricao // Rev. Brasil. med. 1978. - V. 35, N 12. - P. 702707.

169. Haenel H., Bending J. Intestinal flora in health and disease // Progr. Food and Nutr. sci.- 1975.-V. 21, N l.-P. 64.

170. Himanen J.-P., Pyhala L., Olander R.-M. et al. Biological activites of lipo-teichoic acid and peptidoglycan teichoic acid of Bacillus subtilis 168 // J. Gen. Microbiol. - 1993.-V. 139,N 11.-P. 2659-2665.

171. Hirano Y., Matsudo M., Kameyama T. Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis of proteins synthesized during early germination of Bacillus subtilis 168 in the presence of actinomycin D // J. Basic Microbiol. 1991. - V. 31, N 6.- P. 429-436.

172. Humbert Florence Les probiotigues: un sujet d" actualite //Bull. inf. Stat. exp. auicult. Ploufragan. 1988. - V. 28, N 3. - P. 128-130.

173. Inouye S., Kondo S. Amicoumacin and SF-2370, pharmacologically active agents of microbiol origin // Novel Microbial Prod. Med. and Agr. Amsterdam. -1989.-P. 179-193.

174. Johnson С. E. Lethal toxin of Bacillus cereus 1. Relationships and nature of toxin, hemolysin and phospholipase // J. Bacterid. 1967. V. 94, N 2. - P. 306316.

175. Kakinuma A., Hori M., Isono M. Determination of fatty acid in surfactin and elucidation of the total structure of surfactin // Agric. and Biol. Chem. 1969. - V. 33. - P. 973-976.

176. Kaneko J., Matsushima H. Crystal-like structure in the sporulation cells of Bacillus subtilis 168 // J. Electron. Microsc.- 1973. V. 22, N 2. - P. 217-219.

177. Kaneko J., Matsushima H. Crystalline inclusions in sporulating Bacillus subtilis cells // In: Spores YI. Select. Pap. 6th Int. Spore Conf. Washington. - 1975. -P. 580-585.

178. Kitazawa H., Nomura M., Itoh T. J Dairy Sci 1991; 74: 7: 2082 2088.

179. Kubo Kazuhiro. Pure culture of Bacillus subtilis FERM BP-3418 // Пат. N 5364738. США. МКИ A01N 25//00. - публ. 15.11.94.

180. Kudrya V.A., Simonenko L.A. Alkaline serine proteinase and lectine isolation from the culture fluid of Bacillus subtilis // Appl. Microbiol, and Biotechnol. -1994.-V. 41,N5.-P. 505-509.

181. Le H., Anagnostopoulos C. Detection and characterization of naturally occur-ing plasmids //Molec. Gen. Genet. 1977. - V. 157. - P. 167-174.

182. Legakis N.J., Papavassilion J. Thin-layer chromatographic technique for rapid detection of bacterial phospholipases // J. Clin. Microbiol.- 1975. V.2, N 5. - P. 373-376.

183. Leviveld H.L.M., Bachmayer H., Boon B. et al. Safe biotechnology. Part 6. Safety assessment, in respect of human health of microorganisms used in biotechnology // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1995. V. 43, N 3. - P. 389-393.

184. Lin S.-C., Carswell K.S., Sharma M.M., Georgiou G. Continuos production of the lipopeptide biosurfactant of Bacillus licheniformis JF-2 // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1994. - V. 41, N 3. - P. 281-285.

185. Lovett P., Bramucci M. Plasmid DNA in bacilli // In: Microbiology- Washington. 1976. - P. 388-393.

186. Markham R., Wilkie B. Influence of detergent on aerosol allergic sensitization with enzymes of Вас. subtilis // Int. Arch. Allergy and Appl. Immunol. 1976. -V. 51, N 5. - P. 529-543.

187. Maruta Kiyoshi Exclusion of intestinal pahogens by continuous feeding with Bacillus subtilis C-3102 and its influence on the in testinal microflora in broilers // Anim. Sci. and Technol. 1996. - V. 67, N 3. - P. 273-280.

188. Moszer I., Glaser P., Danchin A. SubtiList: A relational database for the Bacillus subtilis genome // Microbiology. 1995. - V. 141, N 2. - P. 261-268.

189. Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Jolken R.H., Manual of Clinical Microbiology, 7th Edition, Washington D.C., ASM Press, 1999

190. Nozari-Renard J. Induction d 5, OInterferon par Bacillus subtilis // Ann. Microbiol. 1978. - V. 129a. - N 4. - P. 525-542.

191. Oh M.K., Kim B.G., Park S.H. Importance of spore mutants for fed-batch and continuous fermentation of Bacillus subtilis // Biotechnol. and Bioeng. 1995. -V. 47, N 6. - P. 696-702.

192. Payne Jewel M. Isolates of Bacillus thuringiensis Hist are active ayanist nematodes / Патент N 5151363, C12 N 1/20, A 01 N 63/00, заявл. 27.07.90., опубл. 29.09.92.

193. Pepys J., Hargreave F., Longbotton Y. Allergic reactions of the lungs to enzymes of Bacillus subtilis // Lancet. 1969. - V. 1, N 44 - 7607. - P. 1181-1184.

194. Peterson W.L., Mackrowiak Ph.A., Barnett C.C. et al. The human gastric bactericidal barrier: Mechanisms of action, relative antibacterial activity, and dietary influences.//J. Infec. Diseases. -1989. -159 № 5. -p.978-985.

195. Prasad S.S.V., Shethna G.J. Biochemistry biological activities of the proteina-ceous crystal of Bacillus thuringiensis // J. Sci. and Ind. Res. 1976. - V. 35, N 10. - P. 626-632.

196. Rocchietta I. The use of Bacillus subtilis in the treatment of the diseases/Minerva Med. -1969. -60. N3/4. -P. 117-123.

197. Rosental G.J., Corsini E. // Methods Immunotoxicol. 1995. V 1, P 327-343

198. Rychen G., Simoes Nunes C. Effets des flores lactigues des produits laitiers fermentes: Une base scientifigue pour l"etude des probiotiques microbiens dans l"espece porcine // Prod. anim. 1995. - V. 8, N 2. - C. 97-104.

199. Salminen Seppo Clinical aspects of probiotics //Ecol. health and Disease.-1999.- 11.-N4.-P. 251-252

200. Shore N., Greene R., Kezeni H. Lung disfuction in worcers exposed to Bacillus subtilis // Environm. Res. 1971. - V. 4, N 6. - P. 512-519.

201. Slein M., Logan G., Characterization of the phospholipases of Вас. cereus and their effects on erytrocytes, bone and kidnei cells // J. Bacteriol. 1965. - V. 90, Nl.-P. 69-81.

202. Somerville H.J. The insecticidal endotoxin of Bacillus thuringiensis // In: Sem. etude theme Prod, natur. et prot. plant. 1977. - P. 253-268.

203. Spira W., Goepfert J. Biological characteristics of an enterotoxin produced by Bacillus cereus // Can. J. Microbiol. 1975. - V. 21, N 8. - P. 1236-1246.

204. Stgard Henri Microbielle v kstfremmer til svin. Teori og prasksis/ Dan veterinaertidsskr. 1989. - V. 72, N 15. - P. 855-864.

205. Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wang Xiaomin Wuhan daxue xuebao. Ziran kexue ban // J. Wuhan Univ. Natur. Sci. Ed. 1996. - V. 42, N 4. - C. 516518.

206. Sumi H. Physiological function of natto // J. Brew. Soc. Jap. 1990. - V. 85, N 8.-P. 518-524.

207. Tihole F. Fizioloski pomer backteriemije z geiunalo microflora // Zdravstv vestn 1982. - V. 51, N 1. P. 3-5.

208. Towalski Z., Rothman H. Enzyme technology //in: The Biotechnological Challenge. Cambridge University Press. Cambridge, 1986 - P. 37 -76.

209. Tsuge Kenji, Ano Takashi, Shoda Macoto. Characterization of Bacillus subtilis YB8, coproducer of lipopeptides surfactin and plipastatin B1 //J. Gen. and Appl. Microbiol. 1995.- 41, N 6. P. 541-545.

210. Van der Waaij D. Colonization resistance of the digestive tract: mechanism and clinical consequences.//Nahrung. -1987. -31 № 5. -p.507-524.

211. Vollaard E.J., Clasener H.A.L., Janssen J.H.M. The contribution of Escherichia coli to microbial colonization resistance.//.!, of Antimicrobial Chemotherapy. -1990.- 26. -p.411-418

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания.
В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.

На сегодняшний день род Bacillus - один из наиболее известных и тщательно изученных представителей рода бацилл. Большинство бактерий рода Bacillus (включая B. subtilis) неопасны для человека и широко распространены в окружающей среде. Отсутствие патогенности у штаммов B. subtilis и их метаболитов позволяет считать
их наиболее перспективными в качестве основы пробиотиков нового поколения. Среди важных свойств, присущих B. subtilis, следует выделить способность закисления среды, а также продуцирования антибиотиков, благодаря чему происходит уменьшение воздействия различных условно-патогенных, а также патогенных микроорганизмов. Продуцирование антибактериальных факторов и различных энзимов B. subtilis стало основой нового
метабиотического продукта - Бактистатина. Он представляет собой биологически активную добавку к пище, состоящую из трех природных компонентов, которые дополняют действие друг друга. Это средство соединило в себе свойства активных метаболитов Bacillus subtilis и энтеросорбента. В статье приводятся результаты клинических исследований с использованием Бактистатина при различных патологиях ЖКТ у взрослых и детей. Полученные данные свидетельствуют о хорошей эффективности и безопасности Бактистатина.

Ключевые слова: Bacillus subtilis, желудочно-кишечный тракт, метабиотик, энтеросорбент, Бактистатин.
Для цитирования: Плотникова Е.Ю. Эффекты активных метаболитов Bacillus subtilis в пробиотическом продукте нового поколения // РМЖ. Медицинское обозрение. 2018. №3. С. 39-44

Effects of active metabolites of Bacillus subtilis in a probiotic product of a new generation
Plotnikova E.Yu.

Kemerovo State Medical University

Currently, Bacillus is one of the most well-known and carefully studied representatives of the genus Bacillus. Most bacteria of the genus Bacillus (including B. subtilis) are not dangerous to humans and are widely spread in the environment. Due to the absence of pathogenicity, the strains of B. subtilis and their metabolites can be considered the most promising basis for probiotics of a new generation. Among the important features of B. subtilis is its ability to acidify the environment and to produce antibiotics, that reduces the effect of various opportunistic pathogens and pathogenic microorganisms. The production of antibacterial factors and enzymes by Bacillus subtilis became the basis for a new metabiotic product - Bactistatin ® . It is a dietary supplement, consisting of three natural components, which complement each other’s action. This drug combines the properties of the active metabolites of Bacillus subtilis and the enterosorbent. The article presents the results of clinical studies of the use of Bactistatin ® in various pathologies of the gastrointestinal tract in adults and children. The data obtained indicate a good efficacy and safety of Bactistatin ® .

Key words: Bacillus subtilis, gastrointestinal tract, metabiotic, enterosorbent, Bactistatin.
For citation: Plotnikova E.Yu. Effects of active metabolites of Bacillus subtilis in a probiotic product of a new generation // RMJ. Medical Review. 2018. № 3. P. 39–44.

Рассмотрены эффекты активных метаболитов Bacillus subtilis в пробиотическом продукте нового поколения. Приводятся результаты клинических исследований с использованием Бактистатина при различных патологиях ЖКТ у взрослых и детей. Полученные данные свидетельствуют о хорошей эффективности и безопасности Бактистатина.

По нашему мнению, пробиотики, имеющиеся в продаже в настоящее время, следует рассматривать как первое поколение средств, направленных на коррекцию микроэкологических нарушений. Будущее развитие традиционных пробиотиков будет включать в себя усовершенство вание этого поколения посредством производства естественных метабиотиков (изготовленных на основе текущих пробиотических штаммов) и синтетических (или полусинтетических) метабиотиков, которые будут аналогами или улучшенными копиями натуральных биоактивных веществ, полученных симбиотическими микроорганизмами .

Преимущества метабиотиков

Метабиотиками называют препараты нового поколения, которые помогают кишечной микрофлоре правильно выполнять свою работу. Более точное определение этой группы было сформулировано профессоромБ.А. Шендеровым . Метабиотики являются структурными компонентами пробиотических микроорганизмов и/или их метаболитов, и/или сигнальных молекул с определенной (известной) химической структурой, которые способны оптимизировать специфичные для организма хозяина физиологические функции, регуляторные, метаболические и/или поведенческие реакции, связанные с деятельностью индигенной микробиоты организма хозяина. Они поддерживают полезные бактерии и изгоняют опасных и бесполезных чужаков - в этом смысле метабиотики похожи на пробиотики, только действуют намного эффективнее и притом никаких бактерий в себе не содержат. В чем же тогда их секрет? Метабиотики справедливо можно отнести к средствам нового поколения управления микрофлорой толстой кишки как экосистемой и метаболическим органом. Они перспективны для коррекции различных функциональных нарушений органов и систем, возникающих вследствие дисбиоза. Активные метаболиты обладают комплексом положительных эффектов: антибактериальные свойства позволяют бороться с патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, не влияя при этом на полезную микрофлору кишечника; благодаря ферментной активности гидролитических энзимов улучшается пищеварение; усиливается иммунная защита
организма.
Их преимущества :
обладают высокой биодоступностью, т. к. метабиотические вещества доходят до толстой кишки на 95–97% в неизмененном виде (у пробиотиков - менее 0,0001%);
в отличие от пробиотических микробов не вступают в конфликт (антагонистические взаимоотношения) с собственной микробиотой пациента;
начинают действовать «здесь и сейчас».
В России терапия и профилактика дисбиотических состояний средствами на метаболитной основе еще только начинаются. В настоящее время активно ведутся разработки метабиотиков для повышения эффективности коррекции и профилактики дисбиотических нарушений. Примером подобного продукта может служить Бактистатин ® .
Терапевтический эффект метабиотиков обусловлен сочетанием нескольких основных действий: способностью обеспечивать необходимые для нормального взаимодействия эпителия и микрофлоры условия гомеостаза в контактной зоне, а также прямым влиянием на физиологические функции и биохимические реакции макроорганизма, воздействием на активность клеток и биопленок. При этом стимулируется собственная микрофлора организма. Такая терапия адекватно физиологична, поскольку осуществляет регулирующее влияние на симбионтные отношения хозяина и его микрофлоры и практически сводит к минимуму возможность побочных эффектов от проводимого лечения .

Многокомпонентный комплекс Бактистатин ®

Бактистатин ® - уникальный запатентованный комплекс усиливающих действие друг друга природных компонентов: метабиотика, пребиотика и сорбента. Бактистатин ® выпускается в форме капсул и применяется в качестве средства, восстанавливающего нормальную кишечную микрофлору и улучшающего функциональное состояние ЖКТ человека. Бактистатин ® производится в соответствии с международными стандартами качества. Производитель сертифицирован по системе ISO 9001-2008. В 1999–2004 гг. группой авто-ров проводились разработка Бактистатина, отработка технологии его производства, экспериментальные и доклинические исследования. В 2004 г. Бактистатин ® был зарегистрирован и вышел на рынок. С 2004 до 2011 г. осуществлялось проведение клинических исследований по оценке его эффективности.
Бактистатин ® содержит (мас.%): стерилизованную культуральную жидкость, содержащую метаболиты Bacillus subtilis - 0,1–2,0%; цеолит - 68–85%; гидролизат соевой муки - 15–30%; стеарат кальция - 0,5–5,0%. Для получения основных компонентов используют следующие методы: микроорганизмы Bacillus subtilis выращивают методом глубинного культивирования, затем культуральную жидкость с микроорганизмами подвергают центрифугированию и стерилизации. Полученную стерилизованную культуральную жидкость (СКЖ), содержащую метаболиты продуцента, смешивают с гидролизатом соевой муки, стеаратом кальция и цеолитом. Образовавшуюся смесь подвергают лиофилизации, при которой происходит иммобилизация биологически активных компонентов на частицах цеолита. Последующая фасовка композиции в желатиновые капсулы обеспечивает защиту всех компонентов от воздействия факторов, вызывающих их деградацию .
Действие Бактистатина базируется на том, что при его транзитном прохождении по ЖКТ в заданной зоне происходят разрушение защитной капсулы и выделение в полость кишечника иммобилизованных на частицах цеолита компонентов пробиотика. При этом вокруг частиц цеолита формируются образования мицеллярной структуры, которые в процессе движения по ЖКТ постепенно высвобождаются с пористой поверхности цеолита. С одной стороны, это позволяет поддерживать в ЖКТ активность биологических компонентов пробиотика не менее суток, что необходимо для восстановления и стимуляции функциональной активности нормальной микрофлоры кишечника. Метаболиты Bacillus subtilis способны тормозить рост патогенной микрофлоры и стимулировать развитие нормальной микрофлоры желудка.
С другой стороны, эффект постепенного высвобождения с поверхности цеолита действующих компонентов приводит к появлению открытых поверхностей его пористой структуры, что обеспечивает включение механизмов ионного обмена и избирательной сорбции токсичных соединений. Это особенно важно для общей детоксикации организма.
Роль и значение отдельных ингредиентов, входящих в состав Бактистатина, можно определить следующим образом: некоторые штаммы Bacillus subtilis продуцируют метаболиты, проявляющие антагонистическую активность против Salmonella paratyphi, Salmonella stenly, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Shigella sonnei , Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii, Candida albicans, Campilobacter jejuni. Также при попадании в организм метаболиты Bacillus subtilis способны продуцировать 2×10 5 ME α2-интерферона. Таким образом, можно ожидать, что при попадании в организм метаболиты этих штаммов будут способствовать оздоровлению микрофлоры в зоне их пребывания .
СКЖ Bacillus subtilis, получаемая при глубинном выращивании этого микроорганизма, содержит уникальный набор биологически активных компонентов, вырабатываемых в процессе жизнедеятельности. Среди них широко представлены различные природные антибактериальные субстанции (бактериоцины, лизоцим, каталазы), которые селективно подавляют рост и размножение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в кишечнике, не влияя при этом на симбионтную микрофлору. Кроме того, микроорганизмы вырабатывают различные ферменты и коферменты, аминокислоты, полипептиды, пребиотические компоненты, способствующие улучшению микроэкологических условий в кишечнике, влияющие на обменные процессы и оказывающие иммуномодулирующее действие .
Цеолит , входящий в состав Бактистатина, обеспечивает транспортировку метаболитов в оптимальном режиме и постепенное высвобождение иммобилизованных на нем биологически активных веществ, что позволяет не менее суток поддерживать уровень активности данного средства. Вместе с тем он обеспечивает связывание и выведение низкомолекулярных токсинов (метан, сероводород, аммиак и др.), тяжелых металлов и радионуклидов. Кроме того, проходя через ЖКТ, цеолит участвует в селективном ионообмене (снимает или уменьшает негативное влияние на организм ионов алюминия, синергически взаимодействует с магнием и фтором, является дополнительным источником микроэлементов). Цеолит как источник кремния принимает участие в реакциях, обеспечивающих синтез коллагена, придает упругость волокнистым тканям; участвует в ингибировании сукцинатдегидрогеназы, эстеразы, гиалуронидазы, ускоряет синтез иролина, гликозаминогликанов; имеет особое значение для формирования структуры кожи, волос, ногтей. Содержание цеолита должно обеспечивать сорбцию всего метаболита. Существенное понижение концентрации цеолита ведет к потере части метаболитов и снижению эффективности, а содержание цеолита в концентрации более 85% приводит к разбавлению Бактистатина малоактивным ингредиентом и также к снижению его эффективности .
Гидролизат соевой муки в данном случае является, с одной стороны, частью защитной среды метаболитов, во многом отвечающей за прочность их сорбции на поверхности цеолита, а с другой стороны - источником аминокислот, обеспечивающим питательные потребности нормальной микрофлоры кишечника и клеток макроорганизма. Основным компонентом является соевый олигосахарид (SOE), обладающий бифидогенными свойствами. Он представляет собой смесь сахарозы (44%), стахиозы (23%), рафинозы (7%) и моносахаридов .
Стеарат кальция выступает в качестве структурообразователя (аэросила). Одновременно он обладает антистрессовым, антиоксидантным эффектом, присутствие соли кальция обеспечивает улучшение состояния костной системы, улучшает деятельность нервной системы .

Опыт применения Бактистатина

М.Ю. Волков и соавт., авторы изобретения, представляют ряд исследований, проведенных с использованием Бактистатина. Применение дозы Бактистатина 500 мг обеспечивает максимальное ингибирование роста
Shigella sonnei и Staphylococcus aureus in vitro. Результаты другого исследования свидетельствуют, что при внесении in vitro на питательную среду дозы 500 мг/мл происходит достоверная стимуляция роста Escherichia coli M-17. По сравнению с контрольными значениями концентраций микроорганизмов эффект увеличения их количества составляет 30%. Это позволяет считать, что для эффективной стимуляции и восстановления нормальной микрофлоры ЖКТ оптимальная доза заявляемой композиции метабиотика находится в диапазоне 400–600 мг .
Под наблюдением находилось 7 человек с целиакией.
У всех пациентов был установлен клинический диагноз глютеновой энтеропатии на основании данных клинического течения заболевания, морфометрического исследования слизистой оболочки 12-перстной кишки, иммунологического исследования крови (определение уровня антиглиадиновых антител и антител к трансглутаминазе). Бактистатин ® назначался в течение 4 нед. по 2 капсулы 2 р./сут. Анализ кала на дисбактериоз проводили до лечения и на 25–31-й день после лечения. У 71,4% больных количество бифидофлоры оказалось сниженным, у 28,6% пациентов количество бифидобактерий находилось на уровне 104–105 кл/г (при норме 108–1010 кл/г). У 14,3% пациентов до лечения бифидобактерии в испражнениях не определялись. Содержание лактобактерий было ниже нормальных значений у 100% пациентов. У 42,9% больных наблюдалось снижение количества бактероидов в испражнениях, у 14,3% больных бактероиды не определялись. Выраженные изменения наблюдались в качественном и количественном составе E. coli: практически у 42,9% пациентов не определялась кишечная палочка с нормальными ферментативными свойствами, у 42,8% больных ее количество было снижено, только у 14,3% пациентов количество кишечной палочки было достаточным. 42,9% от всего количества E. coli составили эшерихии с измененными ферментативными свойствами (в норме - не более 10%).
У 14,3% больных в испражнениях были обнаружены дрожжеподобные грибы рода Candida . Отмечалось увеличение количества клостридий у 14,3% больных, количество которых достигало 108. На фоне приема Бактистатина отмечалось значительное улучшение показателей как анаэробной флоры, так и аэробной составляющей. Отмечалось увеличение количества бифидобактерий и лактобактерий у 57,1% пациентов, бактероидов - у 42,9%; улучшились показатели Е. coli - увеличение количества эшерихий с нормальной ферментативной активностью наблюдалось у 85,7% больных. У больных процент кишечной палочки с измененными свойствами снизился с 42,9% до 28,6%. После проведенной терапии на 14,3% уменьшилось количество гемолитических организмов, условно-патогенных бактерий, дрожжеподобных грибов Candida и клостридий .
М.К. Бехтерева и соавт. провели открытое сравнительное контролируемое исследование, в которое были включены 50 пациентов в возрасте от 6 до 18 лет со среднетяжелой формой ОКИ бактериальной этиологии. Дети были госпитализированы с 1-го по 4-й день болезни, большинство - в первые 2 сут (70% случаев (35 пациентов)). Одна из групп (n = 25) получала помимо базисной терапии Бактистатин ® по 1 капсуле 2 р./сут в течение 7 дней в острый период заболевания на фоне базисной терапии.
Изучение клинического течения инвазивных диарей у обследованных детей показало, что включение в комплексную терапию Бактистатина способствовало сокращению продолжительности основных проявлений заболевания. Так, в группе пациентов, получавших Бактистатин ® , отмечалось достоверное уменьшение длительности лихорадочного периода, раньше купировались боли в животе и диарейный синдром по сравнению с таковыми показателями у детей из группы сравнения. Наиболее значимым эффектом применения Бактистатина при инвазивных ОКИ было сокращение частоты назначения антимикробной терапии в группе пациентов, лечившихся Бактистатином, - до 48% против 76% в группе сравнения (р<0,05). Кроме этого, включение Бактистатина в комплексную терапию инвазивных ОКИ приводило к снижению частоты негладкого течения болезни (суперинфекция, обострение) и способствовало более редкому формированию реконвалесцентного бактериовыделения. В группе пациентов, получавших Бактистатин ® , реконвалесцентное бактериовыделение формировалось в 8% случаев против 20% в группе сравнения (р>0,05). В группе детей, получавших Бактистатин ® , негладкого течения заболевания не наблюдалось, в то время как в группе сравнения негладкое течение (обострение) отмечено у 16% детей (р<0,05). Выявлено, что использование Бактистатина не только приводило к более раннему купированию основных симптомов заболевания, но и имело доказанный эффект, выражающийся в изменении микробиоценоза толстой кишки за счет увеличения доли облигатной и факультативной микрофлоры и уменьшения числа условно-патогенных бактерий .
В.В. Павленко и соавт. изучали эффективность Бактистатина в комплексной терапии 30 больных (из них мужчин - 18, женщин - 12) язвенным колитом (ЯК) различной тяжести с синдромом кишечного дисбактериоза. Средний возраст пациентов составил 37,4±5 лет. Боль-ные ЯК были выделены в 2 группы. 1-я группа (15 пациентов) получала базисную терапию (месалазин, преднизолон, азатиоприн) в сочетании с Бактистатином по 1 капсуле 2 р./сут 3 нед. 2-я группа больных получала только базисную терапию. Группу сравнения (3-я группа) составили 10 больных с билиарнозависимым хроническим панкреатитом. Возраст пациентов в группе сравнения составил 40,3±4 года (соотношение мужчин и женщин 2:1). Эти пациенты получали заместительную ферментную терапию (панкреатин, спазмолитики, антисекреторные препараты в рекомендованных дозах + Бактистатин ® по 1 капсуле 2 р./сут). Лабораторно-инструментальные исследования проводили до и после применения Бактистатина, в среднем через 3 нед.
С целью изучения влияния Бактистатина на микрофлору кишечника исследуемых пациентов распределили по степени выраженности дисбиоза, используя классификацию дисбактериоза по В.Н. Красноголовцу. У всех исследуемых пациентов был выявлен дисбиоз преимущественно 1-й, 2-й и 3-й степени. В 1-й и 3-й группах пациентов на фоне приема Бактистатина отмечено значительное снижение степени выраженности дисбактериоза или его полное исчезновение (при 1-й степени в сравнении со 2-й группой) (р<0,05). После приема Бактистатина у пациентов 1-й группы и группы сравнения отмечались увеличение (или нормализация) количества облигатной флоры (бифидо- и лактобактерий), уменьшение неполноценной и гемолизирующей кишечной палочки, клостридий. В то же время во 2-й группе пациентов отмечалась слабоположительная динамика нормализации кишечного микробиоценоза в отсутствие пробиотика в комплексной терапии (р<0,05). Таким образом, совместное использование базисных препаратов и Бактистатина при ЯК и билиарнозависимом панкреатите существенно повышало эффективность лечения этой патологии ЖКТ .
Э.П. Яковенко и соавт. изучали эффективность Бактистатина в лечении постинфекционного синдрома раздраженного кишечника (ПИ-СРК). Обследовано 40 пациентов с ПИ-СРК. Для оценки микрофлоры кишечника проводились посевы кала и водородный дыхательный тест. К концу 4-недельного курса Бактистатина была достигнута устойчивая клиническая ремиссия ПИ-СРК. В посевах кала снизились уровни условно-патогенной микрофлоры, повысилось до нормы количество бифидо- и лактобактерий, нормализовались показатели водородного дыхательного теста (р<0,05). Бактистатин ® оказывает хорошее терапевтическое действие при лечении больных ПИ-СРК, способствует восстановлению нормальной кишечной микрофлоры и улучшению клинических симптомов (р<0,05). Применение Бактистатина приводило к восстановлению фекальной кишечной микрофлоры, устранению синдрома избыточного бактериального роста в тонкой кишке, адсорбции раздражающих субстанций и газов в кишке, улучшению кишечного пищеварения, повышению порога болевой чувствительности, купированию болевого синдрома, нормализации моторики кишечника и стула .

Заключение

Таким образом, Бактистатин ® проявил себя как средство с многогранной клинической эффективностью и в настоящее время рекомендован в схемах терапии при лечении больных, имеющих дисбактериоз кишечника различного генеза: при хронических заболеваниях пищеварительного тракта, после перенесенных острых кишечных инфекций, на фоне и после приема антибиотиков, после проведения химиотерапии, на фоне длительной гормональной терапии, в условиях хронических стрессовых состояний, при нерациональной диетотерапии.
Использование Бактистатина значительно снижает выраженность диспептических расстройств, улучшает кишечное пищеварение, эффективно гармонизирует состав кишечного микробиоценоза, оказывает иммуномодулирующее действие, положительно влияет на психологический статус больных и способствует повышению качества их жизни. Бактистатин ® не имеет противопоказаний и не вызывает побочных эффектов. Не следует его назначать при индивидуальной непереносимости компонентов. В большинстве случаев другие лечебные и оздоровительные средства (антибиотики, витамины, ферменты, микроэлементы и т. д.) при применении этого средства не нужны, т. к. уже содержатся в их составе и (или) заменяются аналогичными по своему действию.
Сфера применения Бактистатина постоянно расширяется. Уже сейчас его используют в схемах лечения и профилактики дисбиозов различного происхождения, в т. ч. на фоне антибиотикотерапии, заболеваний ЖКТ, инфекционно-воспалительных, аллергических, дерматологических, сердечно-сосудистых заболеваний, болезней обмена и др. Важно, что применение Бактистатина не только позволяет добиться восстановления эубиоза, но и способствует улучшению результатов лечения основного заболевания.